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ベンゾ[アルファ]ピレンヒドロキシラーゼ（AHH）、7-メトキシレソルフィンO-デメチラーゼ（MROD）、および7-エトキシレソルフィンO-デエチラーゼ（EROD）の動態は、組み合わせワクシニアウイルスマウスキップ1A1Aに感染したHEP G2細胞のミクロソームで推定されました。CYP1A2 cDNA。得られたKCATおよびKM値は、肝臓ミクロソームおよび精製マウスCYP1A1およびCYP1A2の値と比較されました。AHH活性の問題では、KCAT CYP1A1/CYP1A2比は、発現、ミクロソーム、および精製CYPでそれぞれ21.2、12.3、および1.5でした。MROD活性に関して、KCAT CYP1A2/CYP1A1比は、発現CYPとミクロソームCYPの両方で3.0であり、精製CYPで8.0でした。EROD活性に関して、KCAT CYP1A2/CYP1A1比は、発現、ミクロソーム、および精製CYPでそれぞれ1.0、1.1、および6.25でした。Furafyllineは、CYP1A2触媒MRODおよびEROD活性のアイソザイム特異的阻害を示しましたが、Alpha-NaphthoflavoneはCYP1A1SのAHH活性とCYP1A2のMROD活性の同様に強力な阻害剤でした。免疫調整ポリクローナル抗CYP1A1（-A2）および抗CYP1A2（-A1）は、マウスCYP1A1とCYP1A2のアイソザイム特異的免疫ブロットティングと阻害を示し、一方、モノクローナル抗体（MAB）1-7は、イムノノブロットと抑制性の違いを示すモノクローナル抗体（MAB）1-7を示しました。効果。ウエスタンブロット/濃度測定分析により、CYP1A1よりもcDNA発現CYP1A2へのmAb 1-7-1の4.8倍低い結合が明らかになりました。結果は、マウスCYP1A1およびCYP1A2の酵素学に関する研究のためのワクシニアウイルス発現システムの信頼性を示しています。
ベンゾ[アルファ]ピレンヒドロキシラーゼ（AHH）、7-メトキシレソルフィンO-デメチラーゼ（MROD）、および7-エトキシレソルフィンO-デエチラーゼ（EROD）の動態は、組み合わせワクシニアウイルスマウスキップ1A1Aに感染したHEP G2細胞のミクロソームで推定されました。CYP1A2 cDNA。得られたKCATおよびKM値は、肝臓ミクロソームおよび精製マウスCYP1A1およびCYP1A2の値と比較されました。AHH活性の問題では、KCAT CYP1A1/CYP1A2比は、発現、ミクロソーム、および精製CYPでそれぞれ21.2、12.3、および1.5でした。MROD活性に関して、KCAT CYP1A2/CYP1A1比は、発現CYPとミクロソームCYPの両方で3.0であり、精製CYPで8.0でした。EROD活性に関して、KCAT CYP1A2/CYP1A1比は、発現、ミクロソーム、および精製CYPでそれぞれ1.0、1.1、および6.25でした。Furafyllineは、CYP1A2触媒MRODおよびEROD活性のアイソザイム特異的阻害を示しましたが、Alpha-NaphthoflavoneはCYP1A1SのAHH活性とCYP1A2のMROD活性の同様に強力な阻害剤でした。免疫調整ポリクローナル抗CYP1A1（-A2）および抗CYP1A2（-A1）は、マウスCYP1A1とCYP1A2のアイソザイム特異的免疫ブロットティングと阻害を示し、一方、モノクローナル抗体（MAB）1-7は、イムノノブロットと抑制性の違いを示すモノクローナル抗体（MAB）1-7を示しました。効果。ウエスタンブロット/濃度測定分析により、CYP1A1よりもcDNA発現CYP1A2へのmAb 1-7-1の4.8倍低い結合が明らかになりました。結果は、マウスCYP1A1およびCYP1A2の酵素学に関する研究のためのワクシニアウイルス発現システムの信頼性を示しています。
Kinetics of benzo[alpha]pyrene hydroxylase (AHH), 7-methoxyresorufin o-demethylase (MROD), and 7-ethoxyresorufin o-deethylase (EROD) were estimated in microsomes of Hep G2 cells infected with a recombinant vaccinia virus bearing mouse CYP1A1 or CYP1A2 cDNAs. The kcat and Km values obtained were compared with those of liver microsomal and purified mouse CYP1A1 and CYP1A2. In the matter of AHH activity, the kcat CYP1A1/CYP1A2 ratios were 21.2, 12.3, and 1.5 for expressed, microsomal, and purified CYPs, respectively. As to MROD activity, the kcat CYP1A2/CYP1A1 ratio was 3.0 for both expressed and microsomal CYPs and was 8.0 for purified CYPs. As regards EROD activity, the kcat CYP1A2/CYP1A1 ratios were 1.0, 1.1, and 6.25 for expressed, microsomal, and purified CYPs, respectively. Whereas furafylline displayed an isozyme-specific inhibition of CYP1A2-catalyzing MROD and EROD activities, alpha-naphthoflavone was an equally strong inhibitor of AHH activity of the CYP1A1s and MROD activities of the CYP1A2s. Immunodepleted polyclonal anti-CYP1A1(-A2) and anti-CYP1A2(-A1) showed an isozyme-specific immunoblotting and inhibition of mouse CYP1A1 and CYP1A2 while monoclonal antibody (Mab) 1-7-1 displayed a striking difference between its immunoblotting and inhibitory effects. Western blot/densitometry analysis revealed a 4.8 times lower binding of Mab 1-7-1 to cDNA-expressed CYP1A2 than to CYP1A1. The results demonstrate the reliability of the vaccinia virus expression system for studies on the enzymology of mouse CYP1A1 and CYP1A2.
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