コラーゲンタンパク質のブラッドフォードタンパク質アッセイの改善

コラーゲンが豊富なサンプルに適応したブラッドフォードのタンパク質測定方法の修正について説明します。クーマシーベースのタンパク質測定方法の使用は、異なるタンパク質で得られた色収率の大きな変動によって制限されます。これは、ローリーとブラッドフォードの方法を直接適用するかなりの量のコラーゲンを含むサンプルで特に重要です。Bradford Colorimetricアッセイで染料試薬として使用されるクーマシー輝くブルーGの希釈溶液に少量のドデシル硫酸ナトリウム（SDS）（0.0035％）の添加により、3つのコラーゲンタンパク質の色応答が4倍増加しました（Col I I I、IIIおよびIV）およびさまざまな非coll菌タンパク質の吸光度の減少。試薬中のSDSの存在は、コラーゲン染料錯体の有意な中骨シフトをもたらしませんでした。ブラッドフォードアッセイの試薬の調製におけるこの単純な修正により、コラーゲンと非コラーゲンタンパク質について同様の応答曲線を得ることができ、膵臓抽出物などのコラーゲンが豊富なサンプルでのタンパク質測定の潜在的な使用の修正アッセイを実現します。

A modification of the protein determination method of Bradford adapted for collagen-rich samples is described. The use of Coomassie-based protein determination methods is limited by the great variation in colour yield obtained for different proteins. This is especially important in samples containing significant amounts of collagen where direct application of the methods of Lowry and Bradford results in underestimated values. Addition of small amounts of sodium dodecyl sulphate (SDS) (0.0035%) to the diluted solutions of Coomassie Brilliant Blue G used as dye reagent in the Bradford colorimetric assay caused a 4-fold increase in the colour response of three collagen proteins (Col I, III and IV) and a decrease in absorbance for various non-collagen proteins. The presence of SDS in the reagent did not result in a significant metachromatic shift of the collagen-dye complexes. This simple modification in the preparation of the reagent for the Bradford assay allows similar response curves to be obtained for collagen and non-collagen proteins, making the modified assay of potential use for protein determination in collagen-rich samples such as pancreatic extracts.