IncWプラスミドR388の夫婦DNA処理領域の遺伝的組織

関節層DNA代謝と動員（MOBW）に関与するINCWプラスミドR388の領域は、TN5TAC1挿入変異誘発、遺伝的補完およびDNA配列決定によって分析されています。3つの遺伝子（TRWA、TRWB、TRWC）がMOBW内でマッピングされました。それらは同じ鎖から、オリットから離れて転写されます。TRWA、TRWB、TRWCの予測産物は、それぞれ121、507、および966アミノ酸のタンパク質です。3つのタンパク質をミニセル発現システムで視覚化し、それぞれ13.5、55、105 kDaの見かけの分子量を示しました。TRWAの推定されたアミノ酸配列は、IncpプラスミドRP4およびR751のTRAJ、InciプラスミドR64のNIKA、およびプラスミドPTF-FC2のMOBBと有意な類似性を示しています。TRWBのアミノ酸配列は、NTP結合モチーフを含む積分膜タンパク質を予測します。プラスミドFおよびR100のトラッドと28％から29％の同一性、プラスミドRP4およびR751のTRAGとの23％の同一性、およびAgrobacterium TumefaciensのTiプラスミドのVird4と20％の同一性が示されています。TRWCのアミノ酸配列は、DNAヘリカーゼのrepファミリーの特徴的なモチーフを示しています。プラスミドFのヘリカーゼI（TRAI）シーケンスと33％の同一性を示します。タンパク質のN末端セグメントでは類似性が最も高く、Vird2を含むDNA-レラキサゼファミリーの特徴的なアミノ酸モチーフの保存を示します。Tiプラスミドの。さまざまな伝達システムにおけるこれら3つのタンパク質の保存された特徴は、非常に広範囲にわたる夫婦DNA動員メカニズムが、INCF、INCI、INCP、INCW、およびTIプラスミドの移動装置によって共有されていることを示唆しています。

The region of the IncW plasmid R388 involved in conjugal DNA metabolism and mobilization (MOBw) has been analyzed by Tn5tac1 insertion mutagenesis, genetic complementation and DNA sequencing. Three genes (trwA, trwB and trwC) were mapped within MOBw. They are transcribed from the same strand and away from oriT. The predicted products of trwA, trwB and trwC are proteins of 121, 507 and 966 amino acids, respectively. The three proteins were visualized in a minicell expression system, showing apparent molecular masses of 13.5, 55 and 105 kDa, respectively. The deduced amino acid sequence of TrwA shows significant similarity to TraJ of the IncP plasmids RP4 and R751, to NikA of the IncI plasmid R64 and to MobB of plasmid pTF-FC2. The amino acid sequence of TrwB predicts an integral membrane protein which contains an NTP-binding motif. It shows 28% to 29% identity with TraD of plasmids F and R100, 23% identity with TraG of plasmids RP4 and R751 and 20% identity with VirD4 of the Ti plasmids of Agrobacterium tumefaciens. The amino acid sequence of TrwC shows the characteristic motifs of the Rep family of DNA helicases. It shows 33% identity with the sequence of helicase I (TraI) of plasmid F. The similarity is highest in the N-terminal segments of the proteins, which show conservation of characteristic amino acid motifs of a family of DNA-relaxases, including VirD2 of the Ti plasmid. The conserved features of these three proteins among the different transfer systems suggest that a very widespread conjugal DNA mobilization mechanism is shared by the transfer apparatuses of IncF, IncI, IncP, IncW and Ti plasmids.