プロテインキナーゼCの細胞内受容体のクローニング：Gタンパク質のベータサブユニットのホモログ

プロテインキナーゼC（PKC）は、活性化時に可溶性から細胞粒子状分率に移行します。活性化されたPKCを微粒子画分で結合する細胞内受容体は、多くの研究によって関係しています。以前の研究では、特定の飽和方法で活性化されたPKCを結合した心臓と脳の粒子分率における30〜36 kDaタンパク質が特定されました。これらのタンパク質は、活性化されたCキナーゼまたはラックの受容体と呼ばれていました。次の研究では、ラックの基準を満たす36 kDaタンパク質（RACK1）をコードするcDNAのクローニングについて説明します。（i）RACK1は、PKCアクティベーターの存在下でPKCを結合しますが、それらの不在ではありません。（II）組換えRACK1へのPKC結合は、擬似堆積ペプチドまたは擬似堆積配列に由来する基質ペプチドによって阻害されませんでした。これは、結合が単にPKC関連とその基質との関連を反映していないことを示しています。（iii）PKCのrack1への結合は飽和と特異的でした。他の2つのプロテインキナーゼはRACK1に結合しませんでした。（iv）RACK1には、アネキシンIおよび脳PKC阻害剤KCIPで以前に特定されたPKC結合配列と相同な2つの短い配列が含まれています。これらの配列に由来するペプチドは、RACK1へのPKC結合を阻害しました。最後に、RACK1はGタンパク質のベータサブユニットのホモログであり、最近ベータアドレナリン受容体キナーゼの膜アンカレッジに関与していました[Pitcher、J.、Inglese、L.、Higgins、J。B.、Arriza、J。A.、Casey、P。J.、Kim、C.、Benovic、J.L.、Kwatra、M.M.、Caron、M。G.＆Lefkowitz、R。J.（1992）Science 257、1264-1267]。私たちのin vitroデータは、PKCを介したシグナル伝達におけるRACK1の役割を示唆しています。

Protein kinase C (PKC) translocates from the soluble to the cell particulate fraction on activation. Intracellular receptors that bind activated PKC in the particulate fraction have been implicated by a number of studies. Previous work identified 30- to 36-kDa proteins in the particulate fraction of heart and brain that bound activated PKC in a specific and saturable manner. These proteins were termed receptors for activated C-kinase, or RACKs. In the following study, we describe the cloning of a cDNA encoding a 36-kDa protein (RACK1) that fulfills the criteria for RACKs. (i) RACK1 bound PKC in the presence of PKC activators, but not in their absence. (ii) PKC binding to the recombinant RACK1 was not inhibited by a pseudosubstrate peptide or by a substrate peptide derived from the pseudosubstrate sequence, indicating that the binding did not reflect simply PKC association with its substrate. (iii) Binding of PKC to RACK1 was saturable and specific; two other protein kinases did not bind to RACK1. (iv) RACK1 contains two short sequences homologous to a PKC binding sequence previously identified in annexin I and in the brain PKC inhibitor KCIP. Peptides derived from these sequences inhibited PKC binding to RACK1. Finally, RACK1 is a homolog of the beta subunit of G proteins, which were recently implicated in membrane anchorage of the beta-adrenergic receptor kinase [Pitcher, J., Inglese, L., Higgins, J. B., Arriza, J. A., Casey, P. J., Kim, C., Benovic, J. L., Kwatra, M. M., Caron, M. G. & Lefkowitz, R. J. (1992) Science 257, 1264-1267]. Our in vitro data suggest a role for RACK1 in PKC-mediated signaling.