Rous肉腫ウイルスのブライアン株に基づく新しいレトロウイルスベクターシステム

Rous肉腫ウイルス（RSV）のBryan HighTiter（BH）株に基づいて、ヘルパー細胞株とベクターシステムを構築しました。BH-RSVは、ENV遺伝子を欠くウイルスの欠陥です。ただし、EnvがTransで提供される場合、非常に高い力価に複製します。BH-RSVと同様に、ベクターにはGAGおよびPOL遺伝子が含まれており、ENV遺伝子がありません。ヘルパー細胞株はTransでENVを供給し、感染性ビリオンの生産を可能にします。ヘルパー細胞株を構築するために、サブグループA Schmidt-ruppin-A（SRA）RSVからのENV遺伝子は、化学的に形質転換されたウールの線維芽細胞系であるQT6細胞に安定してトランスフェクトされました。ベクターとヘルパー細胞株間の相同性を最小限に抑えるために、ENV遺伝子の転写はMULV LTRによって駆動され、3 '処理はSimianウイルス40（SV40）ポリアデニル化シグナルによって制御されます。ベクター細胞とヘルパー細胞のこの組み合わせを使用して、鶏を接種するためにストックを使用しても、組換え複製能力ウイルスが検出されていない高速ウイルスストックを生成できます。このシステムは、トランスジェニック鶏の発達、細胞系統の研究、培養細胞に遺伝子を導入するのに役立つはずです。

We have constructed a helper cell line and vector system based on the Bryan high titer (BH) strain of Rous sarcoma virus (RSV). BH-RSV is a defective virus which lacks an env gene; however, if env is supplied in trans, it replicates to a very high titer. Like BH-RSV, the vector contains gag and pol genes and lacks an env gene. The helper cell line supplies env in trans and permits the production of infectious virions. To construct the helper cell line the subgroup A env gene from the Schmidt-Ruppin-A (SRA) RSV was stably transfected into Qt6 cells, a chemically transformed quail fibroblast line. To minimize homology between the vector and helper cell line, transcription of the env gene is driven by a MuLV LTR, and 3' processing is controlled by the simian virus 40 (SV40) polyadenylation signal. This combination of vector and helper cells can be used to produce high-titer viral stocks in which recombinant replication-competent virus have not been detected even when the stocks were used to inoculate chickens. This system should be useful for developing transgenic chickens, studying cell lineage, and introducing genes into cultured cells.