マイクロタイタープレートに吸着されたタンパク質の運動銀染色と定量化

銀染色を使用して、マイクロタイタープレートウェルに吸着されたタンパク質を検出および定量化しました。銀染色の発達の速度論は、自動マイクロタイタープレートリーダーで分析されました。染色の発達の遅れ時間は、マイクロタイタープレートに吸着されたタンパク質の量の一貫した指標であることがわかりました。マイクロタイタープレートに吸着されていないタンパク質は、銀で効果的に染色されていませんでした。マイクロタイタープレートに適用されたタンパク質の完全な吸着は、非常に希釈バッファーで少量のタンパク質を乾燥させることで可能でした。さまざまなタンパク質の感度の変動は、検査したタンパク質パネルの30％未満でした。運動銀染色からの測定は、マイクロタイタープレートに吸着されたウシアルブミンの銅染色によるものと一致しました。運動銀染色アッセイの精度は、マイクロタイタープレートあたり40〜200 ngの範囲で最適でした。この範囲では、標準偏差の平均は5％未満でした。さらに少量のタンパク質を検出し、ウェルあたり約10 ngに補間することができます。運動銀染色法は、特別なフィルターなしで標準のマイクロタイタープレートリーダーに使用でき、自動システムに容易に適応できます。

A silver stain was used to detect and quantitate proteins adsorbed to microtiter plate wells. The kinetics of the development of the silver stain were analyzed with an automated microtiter plate reader. The lag time for stain development was found to be a consistent indicator of the amount of protein adsorbed to a microtiter plate well. Protein which was not preadsorbed to the microtiter plate was not effectively stained by silver. Complete adsorption of protein applied to the microtiter plate was possible by drying small amounts of protein in very dilute buffers. Variations in sensitivity for different proteins were less than 30% for the panel of proteins examined. Determinations from kinetic silver staining agreed with those from copper staining for bovine albumin adsorbed to microtiter plates. The precision of kinetic silver staining assay was optimal in the range of 40 to 200 ng per microtiter plate well. In this range, the standard deviations averaged less than 5%. Even smaller amounts of protein can be detected and interpolated down to approximately 10 ng per well. The kinetic silver staining method can be used on standard microtiter plate readers without special filters and is readily adaptable to automated systems.