非小細胞肺癌におけるサイクリン依存性キナーゼ阻害剤遺伝子（P15/MTS2/INK4BおよびP18/INK4C）の分子分析

サイクリンおよびサイクリン依存性キナーゼ（CDK）複合体は、細胞周期の調節に重要な役割を果たします。CDK阻害剤（CDKI）は、これらの複合体のキナーゼ活性を阻害し、細胞周期をブロックします。P16/多発性腫瘍抑制因子（MTS）1/CDK4（INK4）A/CDKN2遺伝子のCDKIの阻害剤は、さまざまなヒトがんで頻繁に削除されます。最近、別のCDKI遺伝子、P15/MTS2/INK4Bがクローン化され、P16遺伝子の20 kB以内に局在しました。さらに、P18/INK4Cという名前の3番目のCDKI遺伝子とP16との高度なタンパク質相同性を持つ3番目のCDKI遺伝子が現在クローニングされています。非小細胞肺がん（NSCLC）におけるこれらのCDKI遺伝子の重要性を解明するために、サザンブロットとポリメラーゼ連鎖反応（PCR） - シングル鎖層調整ポリモルフィア（SSCP）によるこれらの遺伝子の変化について、34のNSCLCサンプルのDNAを調べました。分析。同じ個人からの一致した対照正常組織も検査されました。P15遺伝子のホモ接合の欠失は、3つのケースで見つかりました。さらに、比較PCR分析により、これらの削除が確認され、1つの追加の症例がp15遺伝子の異常があることを示唆しました。P18遺伝子の再配列も削除も検出されませんでした。PCR-SSCPおよび異常な移動バンドの直接シーケンスにより、P15およびP18遺伝子の両方で多型ヌクレオチド置換のみを検出しました。要約すると、p15遺伝子の削除の頻度は12％（34例のうち4つ）であり、NSCLCでp15遺伝子の点変異は検出されませんでした。P18遺伝子の場合、異常は検出されませんでした。p16遺伝子変化のためのこれらのNSCLCサンプルの以前の分析では、p15遺伝子のホモ接合性削除を伴う3つの症例がp16遺伝子のホモ接合性削除もあることが明らかになりました。

Cyclin and cyclin-dependent kinase (CDK) complexes play important roles in modulating the cell cycle. The CDK inhibitors (CDKIs) inhibit the kinase activities of these complexes and block the cell cycle. The p16/multiple tumor suppressor (MTS) 1/inhibitor of CDK4 (INK4) a/CDKN2 gene, a CDKI, is frequently deleted in a variety of human cancers. Recently another CDKI gene, p15/MTS2/INK4b, was cloned and localized to within 20 kb of the p16 gene. Moreover, a third CDKI gene, named p18/INK4c and having a high degree of protein homology to p16, has now been cloned. To elucidate the importance of these CDKI genes in non-small cell lung cancers (NSCLCs), we examined DNAs from 34 NSCLC samples for alterations in these genes by Southern blot and polymerase chain reaction (PCR)-single-strand conformational polymorphism (SSCP) analyses. Matched control normal tissues from the same individuals were also examined. Homozygous deletions of the p15 gene were found in three cases. Furthermore, comparative PCR analysis confirmed these deletions and suggested that one additional case had an abnormality of the p15 gene. Neither rearrangements nor deletions of the p18 gene were detected. By PCR-SSCP and direct sequencing of the aberrantly migrating bands, we detected only polymorphic nucleotide substitutions in both the p15 and p18 genes. In summary, the frequency of deletions of the p15 gene was 12% (four of 34 cases), and no point mutations in the p15 gene were detected in the NSCLCs. For the p18 gene, no abnormalities were detected. A previous analysis of these NSCLC samples for p16 gene alterations revealed that the three cases with homozygous deletions of the p15 gene also have homozygous deletions of the p16 gene.