抗LHまたは抗FSH抗体を使用して、ラットのゴナドトロープを磁気ビーズに共有結合して並べ替える手法

ライブLHおよびFSH分泌細胞を並べ替える手法が開発されました。酵素分散後、7日前に去勢した雄ラットからの下垂体細胞の懸濁液を塩化カリウム（KCI 50 mmol/L）で30分間インキュベートし、ゴナドトロピン流出を引き起こしました。次に、LHまたはFSHのいずれかを一時的な表面マーカーとして考慮して、LH（抗LHビーズ）またはFSH（抗FSHビーズ）のいずれかに対する抗体によって分泌細胞を積極的に選択しました。翌朝、KCIによって誘発されたLHとFSHの自発的分泌は一晩で計算されました。両方のゴナドトロピンを分泌できるゴナドトロープで豊富な人口（全体の16％）は、抗LHビーズによって選択されました。これにより、非選択細胞の7倍のLHが放出されました。同様の母集団（合計の14％）は、抗FSHコーティングビーズによって選択されました。これにより、非選択細胞の3.3倍のLHが生成されました。いくつかの実験では、FSHのみを分泌する集団を分離するために、抗LHコーティングビーズで以前に分類されていなかった細胞を、抗FSHビーズの存在下でさらにインキュベートしました。限られた数の細胞がソートされ（総細胞の6％）、両方のゴナドトロピンを産生することができますが、LH/FSH比は低くなりました。同様に、抗FSHビーズで選択によって除外された細胞は、LH分泌細胞のみを取得することを考慮して、抗LHビーズとさらにインキュベートされました。ただし、両方のゴナドトロピンは、これらの細胞（全体の8％）によってまだ分泌され、LH/FSH比が最も高い。結論として、ゴナドトロープで濃縮された去勢された雄ラットの画分には、in vitroで両方のゴナドトロピンを分泌する細胞が含まれています。LHの分泌は一般的です。ただし、分類された集団と自発的な放出への変化との変化との間のLH/FSH比の違いが観察されます。これは、LHとFSHの両方を解放する際にLHおよび他のゴナドロープが「専門化」する可能性があることを示唆しています。

A technique for sorting live LH- and FSH-secreting cells was developed. After enzymatic dispersion, a suspension of pituitary cells from male rats castrated 7 days earlier was incubated in potassium chloride (KCI 50 mmol/l) for 30 min and gonadotropin outflow was provoked. Then, considering either LH or FSH as temporary surface markers, we positively selected the secreting cells by means of antibodies toward either LH (anti-LH beads) or FSH (anti-FSH beads) covalently attached to magnetic beads. The spontaneous secretion of LH and FSH overnight and the release induced by KCI the following morning were calculated. A population enriched in gonadotropes (16% of the total) able to secrete both gonadotropins was selected by means of anti-LH beads; this released 7 times as much LH as non-selected cells. A similar population (14% of the total) was selected by means of anti-FSH-coated beads; this produced 3.3 times as much LH as non-selected cells. In some experiments, the cells not previously sorted with anti-LH-coated beads were further incubated in the presence of anti-FSH beads, in an attempt to isolate a population secreting only FSH. A limited number of cells were sorted (6% of the total cells), able to produce both gonadotropins, but with a lower LH/FSH ratio. Similarly, those cells excluded by the selection with anti-FSH beads were further incubated with anti-LH beads, with a view to obtaining only-LH-secreting cells. However, both gonadotropins were still secreted by these cells (8% of the total), which had the highest LH/FSH ratio. In conclusion, fractions from castrated male rats that are enriched in gonadotropes contain cells that secrete both gonadotropins in vitro. The secretion of LH is prevalent. However, differences in the LH/FSH ratio between the populations sorted and changes from spontaneous to stimulated release are observed. This suggests that some gonadotropes might 'specialize' in releasing LH and others in releasing both LH and FSH.