アデノ関連ウイルスrep78タンパク質は、事前に形成されたビリオンのウイルスDNAに共有結合しています

アデノ関連ウイルス（AAV）DNAの共有結合閉じた末端の解像度は、ウイルス複製タンパク質REP78またはREP68によって媒介されます。精製されたREPタンパク質を用いたin vitro研究は、この分解能と同時に、ウイルスゲノムの5 '末端へのタンパク質の1つの共有結合の付着であることを示しています。ウイルスのライフサイクル中の共有結合したREPタンパク質のin vivoの存在と運命はまだ解明されていません。このレポートでは、免疫沈降分析を使用して、Rep78タンパク質が事前に形成されたビリオンのウイルスDNAに共有結合していることを示しています。付着したRep78は抗体結合およびプロテアーゼ消化の影響を受けやすく、DNA結合はヌクレアーゼ消化の影響を受けやすいため、Rep78はおそらく粒子の外側に位置しています。REPタンパク質は、AAVおよびアデノウイルス共感染細胞からの抽出物中の二本鎖複製形成モノマー（RFM）DNAにも付着します。RFMおよびカプシドAAV DNAへの担当者タンパク質の付着は、共有結合複合体がウイルスアセンブリの中間体であることを示唆しています。これらの観察結果は、自律的なパルボウイルスについて他の人が指摘したものと類似しており、パルボウイルスアセンブリに関する追加の洞察を提供します。

Resolution of the covalently closed terminus of adeno-associated Virus (AAV) DNA is mediated by viral replication protein Rep78 or Rep68. In vitro studies with purified Rep proteins indicate that concurrent with this resolution is a covalent attachment of one of the proteins to the 5' end of the viral genome. The in vivo existence and fate of the covalently associated Rep protein during the virus life cycle has not yet been elucidated. In this report, we use immunoprecipitation analyses to demonstrate that the Rep78 protein is covalently attached to viral DNA in a preformed virion. The attached Rep78 is susceptible to antibody binding and protease digestion, and the DNA linkage is susceptible to nuclease digestion, therefore Rep78 is probably located on the outside of the particle. Rep proteins are also attached to double-stranded replicative-form monomer (RFM) DNA in extracts from AAV and adenovirus coinfected cells. Rep protein attachment to RFM and encapsidated AAV DNA suggest that the covalent complex is an intermediate in virus assembly. These observations are similar to those noted by others for the autonomous parvoviruses and provide additional insights into parvovirus assembly.