異なるリンカーペプチドを含む単一鎖抗体の特性

シングルチェーン抗体は、6つの異なるリンカーペプチドを使用して、抗2フェニルロキサゾロン（OX）抗体のVHおよびVLドメインを結合しました。4つのリンカーペプチドは、真菌セルラーゼCBHIのドメイン間リンカー領域から発生し、28、11、6、2つのアミノ酸残基で構成されていました。使用された他の2つのリンカーペプチドは、15アミノ酸残基を持つ（GGGGS）3リンカーと、22残基の修飾IgG2bヒンジペプチドでした。大腸菌で生成された6つの異なるSCFV誘導体のタンパク質分解の安定性とOX結合特性を調査し、Vドメイン間の結合ペプチドなしを含む対応するFVフラグメントのものと比較しました。異なる抗体断片のハプテン結合特性は、ELISAとBiacoretMによって研究されました。ドメイン間リンカーペプチドは、FVフラグメントと比較すると抗体フラグメントのハプテン結合特性を改善しましたが、プロテアーゼに対する感受性をわずかに増加させました。11、6、2つの残基の短いCBHIリンカーを持つ単一鎖抗体は、マルチマーを形成する傾向があり、より高い明らかな親和性につながりました。リンカーを備えたフラグメントは、11つを超えてモノマーのままでした。

Single-chain antibodies were constructed using six different linker peptides to join the VH and VL domains of an anti-2-phenyloxazolone (Ox) antibody. Four of the linker peptides originated from the interdomain linker region of the fungal cellulase CBHI and consisted of 28, 11, six and two amino acid residues. The two other linker peptides used were the (GGGGS)3 linker with 15 amino acid residues and a modified IgG2b hinge peptide with 22 residues. Proteolytic stability and Ox binding properties of the six different scFv derivatives produced in Escherichia coli were investigated and compared with those of the corresponding Fv fragment containing no joining peptide between the V domains. The hapten binding properties of different antibody fragments were studied by ELISA and BIAcoreTM. The interdomain linker peptide improved the hapten binding properties of the antibody fragment when compared with Fv fragment, but slightly increased its susceptibility to proteases. Single-chain antibodies with short CBHI linkers of 11, six and two residues had a tendency to form multimers which led to a higher apparent affinity. The fragments with linkers longer than 11 residues remained monomeric.