カンジダグラブラタERG3およびERG11遺伝子の削除：細胞生存率、細胞成長、ステロール組成、および抗真菌性感受性への影響

Candida glabrata L5（LEU2）のDelta 5,6 Sterol Desaturase（Erg3遺伝子）と14のアルファメチルステロールデメチラーゼ（ERG11遺伝子）をコードする構造遺伝子をクローン化して配列決定しました。これらの遺伝子の単一および二重変異体は、遺伝子欠失によって作成されました。ステロールプロファイル、有酸素的バイビリティ、抗真菌性感受性、生成時間を含むこれらの変異体の表現型を研究しました。主にergosta-7,22-dien-3ベータオールを蓄積した株L5D（ERG3デルタ:: leu2）は有酸素的に実行可能であり、抗真菌剤の影響を受けやすいままでしたが、親の緊張よりも生成時間が遅かったです。L5lud（leu2 erg11 delta :: ura3）株には、エルゴステロールと成長のための嫌気性環境が補充された培地が必要でした。L5LUD（LEU2 ERG11 DELTA :: URA3）から入手した自発的なエアロビン状の生存性変異体L5LUD40R（LEU ERG11 Delta :: URA3）は、ラノステロールとオッコシフォリオールを蓄積することがわかったため、アゾール抗糖に耐性があることがわかり、アンフェン酸塩の耐性があることが示されました。B、およびL5（LEU2）と比較して、生成時間が1.86倍増加しました。二重放出変異体L5DUD61（ERG3 Delta :: Leu2 ERG11 Delta :: URA3）は有酸素的に生存可能であり、主に14個のアルファメチルフェコステロールを生成し、L5LUD40Rと同じ抗真菌性感受性パターンを持っていました（LEU2 ERG11 Delta :: URA3）、およびそのITS生成時間は、L5（LEU2）の生成時間よりも3倍大きかった。Northern（RNA）分析により、単一削除変異体が、未定のERG3およびERG11遺伝子に対するメッセージが著しく増加していることが明らかになりました。これらの結果は、抗真菌性感受性の違いと、この研究で作成されたC. glabrataエルゴステロール変異体と、以前にサッカロミセスセレビシアについて以前に報告された同様の遺伝的病変を持つステロール変異体の間に有酸素生存率の回復が存在することを示しています。

We have cloned and sequenced the structural genes encoding the delta 5,6 sterol desaturase (ERG3 gene) and the 14 alpha-methyl sterol demethylase (ERG11 gene) from Candida glabrata L5 (leu2). Single and double mutants of these genes were created by gene deletion. The phenotypes of these mutants, including sterol profiles, aerobic viabilities, antifungal susceptibilities, and generation times, were studied. Strain L5D (erg3 delta::LEU2) accumulated mainly ergosta-7,22-dien-3 beta-ol, was aerobically viable, and remained susceptible to antifungal agents but had a slower generation time than its parent strain. L5LUD (LEU2 erg11 delta::URA3) strains required medium supplemented with ergosterol and an anaerobic environment for growth. A spontaneous aerobically viable mutant, L5LUD40R (LEU erg11 delta::URA3), obtained from L5LUD (LEU2 erg11 delta::URA3), was found to accumulate lanosterol and obtusifoliol, was resistant to azole antifungal agents, demonstrated some increase in resistance to amphotericin B, and exhibited a 1.86-fold increase in generation time in comparison with L5 (leu2). The double-deletion mutant L5DUD61 (erg3 delta::LEU2 erg11 delta::URA3) was aerobically viable, produced mainly 14 alpha-methyl fecosterol, and had the same antifungal susceptibility pattern as L5LUD40R (LEU2 erg11 delta::URA3), and its generation time was threefold greater than that of L5 (leu2). Northern (RNA) analysis revealed that the single-deletion mutants had a marked increase in message for the undeleted ERG3 and ERG11 genes. These results indicate that differences in antifungal susceptibilities and the restoration of aerobic viability exist between the C. glabrata ergosterol mutants created in this study and those sterol mutants with similar genetic lesions previously reported for Saccharomyces cerevisiae.