in vitroでのウリジル酸削除の直接的な視覚化は、キネトプラスチドRNA編集のメカニズムを示唆しています

合成ATPase 6 pre-mRNAの3'最大の編集部位からのウリジル酸の削除は、T.Brucieミトコンドリア溶解物の20S画分の放射標識基質RNAと合成GRNAの共インコベーションにより直接視覚化できます。基質RNA切断はGRNAであり、削除されるウリジレートに3 'に発生します。U残基は、2つの前mRNAの半分を再生する前に、5 '切断産物の3'末端から連続的に除去されているように見えます。GRNA/mRNAキメラ分子も生成されます。時間経過の実験は、切断中間体と編集された製品の後にキメラが現れることを示しています。さらに、変異体GRNAは編集された製品の形成を促進しますが、検出可能なキメラではありません。我々の結果は、キメラ分子が編集の非生産的な最終生成物であり、削除されたuのリポジトリとして機能する中間体ではないキメトプラスチドRNA編集のモデルを示唆しています。

Deletion of uridylates from the 3'-most editing site of synthetic ATPase 6 pre-mRNA can be visualized directly by coincubation of a radiolabeled substrate RNA and a synthetic gRNA in 20S fractions of T.brucie mitochondrial lysates. Substrate RNA cleavage is gRNA directed and occurs 3' to the uridylates to be deleted. U residues appear to be sequentially removed from the 3' end of the 5' cleavage product prior to religation of the two pre-mRNA halves. gRNA/mRNA chimeric molecules are also produced. Time course experiments indicate that chimeras appear after cleavage intermediates and edited product. Furthermore, a mutant gRNA promotes formation of edited product but not detectable chimeras. Our results suggest a model for kinetoplastid RNA editing in which chimeric molecules are nonproductive end products of editing and not intermediates that serve as a repository for deleted U's.