ASN-X-SERシーケンのX位置にあるアミノ酸は、N結合コアグリコシル化効率の重要な決定要因です

N結合グリコシル化は、タンパク質の発現、構造、機能に大きく影響する可能性のあるタンパク質処理の一般的な形態です。N結合グリコシル化は一般に、ASN-X-SER/THRで一般に発生します。ここで、Xはproを除くアミノ酸です。コアグリコシル化に対するXアミノ酸の衝撃を評価するために、Rabiesウイルス糖タンパク質変異体は、ASN-X-SER SeconのX位置に置換された20の一般的なアミノ酸のそれぞれとともに、部位指向の変異誘発によって生成されました。各バリアントのシーコンでのコアグリコシル化の効率は、犬の膵臓ミクロソームを補充したウサギ網状細胞溶解物細胞のない翻訳システムで定量化されました。X位置でのPROの存在はコアグリコシル化を完全にブロックしましたが、TRP、ASP、CHI、およびLEUは非効率的なコアグリコシル化と関連していました。他のバリアントはより効率的にグリコシル化されており、いくつかは完全にグリコシル化されていました。これらの発見は、Xアミノ酸がN結合コアグリコシル化効率の重要な決定因子であることを示しています。

N-Linked glycosylation is a common form of protein processing that can profoundly affect protein expression, structure, and function. N-Linked glycosylation generally occurs at the sequon Asn-X-Ser/Thr, where X is any amino acid except Pro. To assess the impact of the X amino acid on core glycosylation, rabies virus glycoprotein variants were generated by site-directed mutagenesis with each of the 20 common amino acids substituted at the X position of an Asn-X-Ser sequon. The efficiency of core glycosylation at the sequon in each variant was quantified in a rabbit reticulocyte lysate cell-free translation system supplemented with canine pancreas microsomes. The presence of Pro at the X position completely blocked core glycosylation, whereas Trp, Asp, Chi, and Leu were associated with inefficient core glycosylation. The other variants were more efficiently glycosylated, and several were fully glycosylated. These findings demonstrate that the X amino acid is an important determinant of N-linked core-glycosylation efficiency.