複製プロテイン A は、ヒト DNA 修復切除ヌクレアーゼの XPF-ERCC1 および XPG サブユニットに構造特異的なエンドヌクレアーゼ活性を付与します

XPF-ERCC1およびXPGタンパク質は、ヒトヌクレオチド切除修復に関与するヌクレアーゼです。この研究では、バブルまたはループ構造を含むDNA基質を使用して、両方のヌクレアーゼの構造固有の接合接合部削減活動を特徴付けました。XPF-ERCC1およびXPGの接合部カット活性は、ヒト複製タンパク質A（RPA）によって大きく刺激され、異種一本鎖DNA結合タンパク質がヒトRPAに代わることはできませんでした。RPAとXPGの間で発生することが知られているRPAとXPF-ERCC1の間の特定の相互作用をテストするために、固定化された「バブル」基板を含むプルダウンアッセイを使用しました。XPF-ERCC1複合体のバブル基質への結合がRPAによって増強され、切除ヌクレアーゼシステムにおけるRPAの可能なメカニズム、つまり特定の作用部位へのヌクレアーゼサブユニットのターゲティングであることが示唆されることがわかりました。さらに、XPF-ERCC1およびXPGヌクレアーゼによるRPAに促進された接合部切断は、「ループ」基質でも観察され、XPF-ERCC1、XPG、およびRPA MayがDNAからループ構造を除去する際に、他のものとは無関係に機能する可能性が高くなりました。ヒトエキシヌクレアーゼのサブユニット。

XPF-ERCC1 and XPG proteins are nucleases that are involved in human nucleotide excision repair. In this study, we characterized the structure-specific junction-cutting activities of both nucleases using DNA substrates containing a bubble or loop structure. We found that the junction-cutting activities of XPF-ERCC1 and XPG were greatly stimulated by human replication protein A (RPA), while heterologous single-stranded DNA-binding proteins could not substitute for human RPA. To test for specific interaction between RPA and XPF-ERCC1 as is known to occur between RPA and XPG, we employed a pull-down assay with immobilized "bubble" substrate. We found that the binding of XPF-ERCC1 complex to the bubble substrate was enhanced by RPA, suggesting a possible mechanism for RPA in the excision nuclease system, that is the targeting of the nuclease subunits to their specific sites of action. Furthermore, the RPA-promoted junction cutting by XPF-ERCC1 and XPG nucleases was observed with "loop" substrates as well, raising the possibility that XPF-ERCC1, XPG, and RPA may function in removing loop structures from DNA, independent of the other subunits of the human excinuclease.