RAN/TC4変異体は、SNRNPとタンパク質の輸入の一般的な要件を核に識別します

運動競争の実験により、タンパク質とU SNRNPの核輸入に必要な少なくともいくつかの要因が異なることが実証されています。両方の輸入プロセスにはエネルギーが必要であり、タンパク質の輸入の場合、エネルギー要件は、RAN GTPaseによるGTP加水分解によって少なくとも部分的に満たされることが知られています。in vitroでタンパク質とU SNRNPの核輸入に対する非加水分解性GTP類似体と2つの変異体RANタンパク質の効果を比較しました。変異体RANタンパク質は異なる欠陥を持っています。Q69L（グルタミン69はロイシンに変化しました）はGTP加水分解に欠陥があり、T24N（スレオニン24はアスパラギンに変化しました）はGTPの結合に欠陥があります。タンパク質とSNRNPの両方の輸入は、核輸入の支配的な陰性阻害剤として機能する2つの変異ランタンパク質の存在、または非加水分解性GTP類似体とのインキュベーションのいずれかに敏感です。これは、核へのU SNRNPおよびタンパク質の輸入のためのGTPase活性の要件があることを示しています。2つの変異体RANタンパク質の支配的な負の効果は、1つの共通成分でタンパク質とSNRNPのインポート共有の経路が共有していることを示しています。

Kinetic competition experiments have demonstrated that at least some factors required for the nuclear import of proteins and U snRNPs are distinct. Both import processes require energy, and in the case of protein import, the energy requirement is known to be at least partly met by GTP hydrolysis by the Ran GTPase. We have compared the effects of nonhydrolyzable GTP analogues and two mutant Ran proteins on the nuclear import of proteins and U snRNPs in vitro. The mutant Ran proteins have different defects; Q69L (glutamine 69 changed to leucine) is defective in GTP hydrolysis while T24N (threonine 24 changed to asparagine) is defective in binding GTP. Both protein and snRNP import are sensitive either to the presence of the two mutant Ran proteins, which act as dominant negative inhibitors of nuclear import, or to incubation with nonhydrolyzable GTP analogues. This demonstrates that there is a requirement for a GTPase activity for the import of U snRNPs, as well as proteins, into the nucleus. The dominant negative effects of the two mutant Ran proteins indicate that the pathways of protein and snRNP import share at lease one common component.