PLEF、哺乳類細胞におけるグルタチオンS-トランスフェラーゼ融合タンパク質の発現のための新規ベクター

発現ベクターであるPLEFは、マウスL929線維芽細胞のグルタチオンS-トランスフェラーゼ（GST）融合タンパク質として、ヒトCD95（FAS/APO-1）アポトーシス受容体の細胞内ドメイン（IC）を生成するために使用されています。GST :: CD95ICは、グルタチオンセファロースを使用して単一のステップで親和性を促進しました。32p標識L929細胞からのGST :: CD95ICの精製とトロンビンによる切断により、CD95ICはGST融合タンパク質として生成された場合、in vivoでリン酸化されたことが明らかになりました。したがって、PLEFは、真核生物タンパク質のin vivo修飾部位のマッピングを促進する可能性があります。

An expression vector, pLEF, has been used to produce the intracellular domain (IC) of the human CD95 (Fas/APO-1) apoptosis receptor as a glutathione S-transferase (GST) fusion protein in murine L929 fibroblasts. GST::CD95IC was affinity-purified in a single step using glutathione-Sepharose. Purification of GST::CD95IC from 32P-labelled L929 cells and cleavage with thrombin revealed that CD95IC was phosphorylated in vivo when produced as a GST fusion protein. Therefore, pLEF may facilitate the mapping of in vivo-modified sites of eukaryotic proteins.