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大腸菌のペプチジル-TRNAヒドロラーゼに影響を与える条件付き致死温度感受性変異体の存在は、この酵素が細胞生存に不可欠であることを示唆しています。ここでは、ヒドロラーゼをコードする遺伝子であるこの変異体の染色体抑制とマルチコピー抑制因子の両方の分離を報告します。あるケースでは、抑制の原因となるクローン遺伝子はLYSVであることが示されています。これは、ユニークなリジンアクセプターTRNAをコードする3つの遺伝子の1つです。10のクローン化されたtRNA遺伝子は効果がありません。LYSVの過剰発現は、TRNA(LYS)濃度の2〜3倍の増加につながり、非透過温度で細胞内のペプチジル-TRNAヒドロラーゼ活性の不足を克服します。逆に、PTHでは、LYSVの黄土色抑制因子(SUPN)への変換によりTRNA(LYS)濃度が減少するSUPN二重変異体では、初期PTH変異体の熱感度が強調されます。したがって、両方の変異を持つ細胞は、PTH変異体がほぼ正常に成長する温度である39度Cで実質的に成長を示しません。二重変異体の成長は、プラスミドからのLYSVの発現によって回復します。これらの結果は、PTHが不足しているE.coliの変異体の成長の制限は、ペプチジル-TRNAとしてのTRNA(LYS)の隔離によるものであることを示しています。これは、このtRNAが特にリボソームからの早期解離を起こしやすいという以前の観察と一致しています。
大腸菌のペプチジル-TRNAヒドロラーゼに影響を与える条件付き致死温度感受性変異体の存在は、この酵素が細胞生存に不可欠であることを示唆しています。ここでは、ヒドロラーゼをコードする遺伝子であるこの変異体の染色体抑制とマルチコピー抑制因子の両方の分離を報告します。あるケースでは、抑制の原因となるクローン遺伝子はLYSVであることが示されています。これは、ユニークなリジンアクセプターTRNAをコードする3つの遺伝子の1つです。10のクローン化されたtRNA遺伝子は効果がありません。LYSVの過剰発現は、TRNA(LYS)濃度の2〜3倍の増加につながり、非透過温度で細胞内のペプチジル-TRNAヒドロラーゼ活性の不足を克服します。逆に、PTHでは、LYSVの黄土色抑制因子(SUPN)への変換によりTRNA(LYS)濃度が減少するSUPN二重変異体では、初期PTH変異体の熱感度が強調されます。したがって、両方の変異を持つ細胞は、PTH変異体がほぼ正常に成長する温度である39度Cで実質的に成長を示しません。二重変異体の成長は、プラスミドからのLYSVの発現によって回復します。これらの結果は、PTHが不足しているE.coliの変異体の成長の制限は、ペプチジル-TRNAとしてのTRNA(LYS)の隔離によるものであることを示しています。これは、このtRNAが特にリボソームからの早期解離を起こしやすいという以前の観察と一致しています。
The existence of a conditional lethal temperature-sensitive mutant affecting peptidyl-tRNA hydrolase in Escherichia coli suggests that this enzyme is essential to cell survival. We report here the isolation of both chromosomal and multicopy suppressors of this mutant in pth, the gene encoding the hydrolase. In one case, the cloned gene responsible for suppression is shown to be lysV, one of three genes encoding the unique lysine acceptor tRNA; 10 other cloned tRNA genes are without effect. Overexpression of lysV leading to a 2- to 3-fold increase in tRNA(Lys) concentration overcomes the shortage of peptidyl-tRNA hydrolase activity in the cell at non-permissive temperature. Conversely, in pth, supN double mutants, where the tRNA(Lys) concentration is reduced due to the conversion of lysV to an ochre suppressor (supN), the thermosensitivity of the initial pth mutant becomes accentuated. Thus, cells carrying both mutations show practically no growth at 39 degrees C, a temperature at which the pth mutant grows almost normally. Growth of the double mutant is restored by the expression of lysV from a plasmid. These results indicate that the limitation of growth in mutants of E.coli deficient in Pth is due to the sequestration of tRNA(Lys) as peptidyl-tRNA. This is consistent with previous observations that this tRNA is particularly prone to premature dissociation from the ribosome.
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