タバコモザイクウイルスの2つの株によって誘発される微分症状を制御する126 kDaタンパク質遺伝子のヌクレオチドのマッピング

タバコモザイクウイルスのマスクされたマスク（M）およびU1株の微分症状決定因子は、以前に126 kDaタンパク質とN末端3分の2をコードする5'親分野のオープンリーディングフレーム（ORF）にマッピングされました。183-kdaタンパク質。両方のタンパク質はウイルスRNAの蓄積に影響を与えますが、他の関連するウイルスの類似のORFの配列で保存されていない126-kDA遺伝子内の大規模ドメインによる症状の形成の機能と影響は不明です。現在の研究では、各株（すなわち、MIC-TMVおよびU1-TMV）を表すcDNAクローンを、これらの非保存ドメインで変異させて、ニコチアナタバカムのモザイク症状誘導の原因となるヌクレオチドをさらに定義しました。MIC-TMV配列から8つのヌクレオチド置換を含む変異体の子孫ウイルスは、MIC-TMVの126 kDAタンパク質ORF内のU1-TMVシーケンスにU1-TMV様症状を誘発しました。これらの8つのヌクレオチドの中で単一または複数の置換は、症状調節に重要な残基をさらに定義しました。MIC-TMVおよびU1-TMV配列の補完的な置換は、相補的な視覚症状を誘発する子孫ウイルスを常に生成するわけではありませんでした。いくつかの変異体の子孫は、症状の表現型に影響を与えることが示された特定の位置に第二部の自然変異を含んでいた。安定した部位指向変異体のサブセットの場合、接種された葉のこれらのクロロ化病変における全身症状の重症度とクロロティック病変のサイズまたはウイルスの蓄積の間に相関はありませんでした。

The differential symptom determinants of the Holmes' masked (M) and U1 strains of tobacco mosaic virus previously were mapped to the 5'-coterminal open reading frame (ORF) encoding the 126-kDa protein and the N-terminal two-thirds of the 183-kDa protein. Both proteins influence viral RNA accumulation, but the function of, and impact on, symptom formation by large domains within the 126-kDa gene, which are not conserved with sequences in analogous ORFs from other related viruses, are unknown. In the current study, cDNA clones representing each strain (i.e., MIC-TMV and U1-TMV) were mutated in these nonconserved domains to further define the nucleotides responsible for mosaic symptom induction on Nicotiana tabacum. Progeny virus of a mutant containing only eight nucleotide substitutions from the MIC-TMV sequence to the U1-TMV sequence within the 126-kDa protein ORF of MIC-TMV induced U1-TMV-like symptoms. Single or multiple substitutions among these eight nucleotides further defined residues critical for symptom modulation. Complementary substitutions in the MIC-TMV and U1-TMV sequences did not always yield progeny virus that induced complementary visual symptoms. Progeny of some mutants contained second-site spontaneous mutations at specific positions shown to influence symptom phenotype. For a subset of the stable site-directed mutants, there was no correlation between severity of systemic symptoms and chlorotic lesion size or virus accumulation in these chlorotic lesions on inoculated leaves.