好中球呼吸器バーストのフローサイトメトリー分析のためのジヒドロロホダミン123の使用に関する制限

ジヒドロロホダミン123（DHR）の蛍光化合物ローダミン123（Rho123）への細胞内酸化を使用して、活性化好中球における酸素代謝産物の産生を検出しました。このアッセイでは、総白血球製剤を使用できます。これは、呼吸バーストのプライミングが研究されている場合に大きな利点です。このアッセイでプライミングが研究されているときに考慮すべき条件を定義しました。DHR酸化の程度も速度もNADPHオキシダーゼ活性の速度と一致しないことがわかりました。さらに、DHR酸化は、白血球懸濁液中の好中球の絶対数と相対数、DHR濃度、およびミエロペルオキシダーゼの可用性によって影響を受けます。この研究で提示された結果は、DHRを使用して好中球の呼吸バーストを研究するために慎重に設計された実験の必要性を強調しています。

Intracellular oxidation of dihydrorhodamine 123 (DHR) to the fluorescent compound rhodamine 123 (Rho123) was used to detect the production of oxygen metabolites in activated neutrophils. Total leukocyte preparations can be used in this assay, which is a great advantage when priming of the respiratory burst is studied. We have defined the conditions that should be taken into account when priming is studied with this assay. We found that neither the extent nor the kinetics of DHR oxidation match those of NADPH oxidase activity. In addition, DHR oxidation is influenced by the absolute and relative number of neutrophils in the leukocyte suspension, by the DHR concentration and by myeloperoxidase availability. The results presented in this study emphasize the need for carefully designed experiments when DHR is used to study the respiratory burst in neutrophils.