出芽酵母で繰り返し使用するための新しい効率的な遺伝子破壊カセット

このマーカーは、従来の酵母マーカーを欠くさまざまな酵母株で使用できるため、支配的なKanrマーカー遺伝子は、出芽酵母の遺伝子破壊実験に重要な役割を果たします。LOXP-KANMX-LOXP遺伝子破壊カセットを開発しました。これは、異種KANRマーカーの利点とCre-Lox P組換えシステムの利点を組み合わせたものです。この破壊カセットは、正しいゲノム軌跡（日常的に70％）での相同統合を介して高効率と統合されます。CREリコンビナーゼの発現により、KANMXモジュールはLOXP部位間の効率的な組換えによって切除され、染色体遺伝子座に単一のLOXP部位が残ります。このシステムにより、KANRマーカー遺伝子の繰り返しの使用が可能になり、遺伝子ファミリーの機能分析にとって大きな利点があります。

The dominant kanr marker gene plays an important role in gene disruption experiments in budding yeast, as this marker can be used in a variety of yeast strains lacking the conventional yeast markers. We have developed a loxP-kanMX-loxP gene disruption cassette, which combines the advantages of the heterologous kanr marker with those from the Cre-lox P recombination system. This disruption cassette integrates with high efficiency via homologous integration at the correct genomic locus (routinely 70%). Upon expression of the Cre recombinase the kanMX module is excised by an efficient recombination between the loxP sites, leaving behind a single loxP site at the chromosomal locus. This system allows repeated use of the kanr marker gene and will be of great advantage for the functional analysis of gene families.