フィブリリン-1とフィブリン-2が相互作用し、いくつかの組織に共局在しています

直径10〜12 nmのミクロフィブリルは、主要な成分としてフィブリリンを含む弾性および非弾性組織に見られます。これらのミクロフィブリルの超分子構造と、それが基づいているタンパク質相互作用についてはほとんど知られていません。フィブリリン-1のタンパク質結合リガンドを識別するために、固相アッセイにおける組換えフィブリリン-1ペプチドの異なる細胞外マトリックスタンパク質への結合をテストしました。テストされたタンパク質のうち、フィブリン-2のみが、カルシウム依存的にフィブリリン-1のN末端半分であるRF11に有意な結合を示しました。表面プラズモン共鳴は、kd = 56 nmによる高親和性結合を示しました。組換えフィブリリン-1ペプチドが重複すると、フィブリン-2の結合部位をフィブリリン-1のN末端まで絞り込みました（アミノ酸位置45-450）。組織の免疫蛍光により、皮膚、ペリコンドリウム、血管の弾性内膜、および腎臓糸球体におけるフィブリリンとフィブリン-2の共局在が実証されました。フィブリン-2は、眼の毛様体ゾーン、腱、および腎臓尿細管と肺肺胞の周りの結合組織には存在しませんでした。皮膚中のミクロフィブリル上のフィブリン-2の免疫金標識は、ミクロフィブリルとアモルファスエラスチンコアの間の界面で優先的に発見され、in vivoではフィブリリン-1とフィブリン-2の間の相互作用が細胞の発現と堆積だけでなくタンパク質によって調節されることを示唆しています。 - タンパク質相互作用。

Microfibrils 10-12 nm in diameter are found in elastic and non-elastic tissues with fibrillin as a major component. Little is known about the supramolecular structure of these microfibrils and the protein interactions it is based on. To identify protein binding ligands of fibrillin-1, we tested binding of recombinant fibrillin-1 peptides to different extracellular matrix proteins in solid phase assays. Among the proteins tested, only fibulin-2 showed significant binding to rF11, the N-terminal half of fibrillin-1, in a calcium-dependent manner. Surface plasmon resonance demonstrated high affinity binding with a Kd = 56 nM. With overlapping recombinant fibrillin-1 peptides, the binding site for fibulin-2 was narrowed down to the N terminus of fibrillin-1 (amino acid positions 45-450). Immunofluorescence in tissues demonstrated colocalization of fibrillin and fibulin-2 in skin, perichondrium, elastic intima of blood vessels, and kidney glomerulus. Fibulin-2 was not present in ocular ciliary zonules, tendon, and the connective tissue around kidney tubules and lung alveoli, which all contain fibrillin. Immunogold labeling of fibulin-2 on microfibrils in skin was found preferentially at the interface between microfibrils and the amorphous elastin core, suggesting that in vivo the interaction between fibrillin-1 and fibulin-2 is regulated by cellular expression and deposition as well as by protein-protein interactions.