マクロファージに機能的なギャップジャンクションまたは接合部ヘミチャネルはありますか？

免疫系の移動細胞における機能的ギャップ接合部の存在は、物議を醸す問題です。このレポートでは、ギャップジャンクションを形成するタンパク質であるコネキシン-43が腹膜マクロファージとマクロファージ細胞株（J774）で北部およびウエスタンブロット分析によって報告されているため、1つの特定の細胞タイプ、すなわちマクロファージに焦点を合わせました。。これらの細胞型が機能的ギャップ接合部を発現したかどうかをテストするために、ルシファー黄色の細胞内注射により色素結合をアッセイしました。我々は、非刺激マクロファージがそれ自体の間で結合されておらず、コネキシン-43によって形成された機能的ギャップジャンクションを発現する上皮細胞株と機能的なギャップ接合を形成しなかったことが観察されました。染料の結合は、リポ多糖またはインターフェロンガンマによって以前に活性化されたマクロファージ間でも検出されませんでした。さらに、デュアルセル全体のパッチクランプのより高感度の技術を使用して機能的な結合の存在を調べましたが、再びマクロファージ間の電気結合は見つかりませんでした。また、色素取り込みアッセイと細胞パッチクランプ技術全体を使用して、細胞外アデノシン三リン酸（ATP）によって活性化されたヘミガップ接合チャネルの存在の可能性を調べました。ギャップジャンクションヘミチャネル（オクタノールへの曝露および細胞内pHへの曝露）はATP誘発性ルシファーの黄色の摂取量を減少させませんでしたが、ヘミチャネルの開口部を増加させると予想される条件はATP透過化（ジブリルアデノシンモノリン酸）に影響しませんでした（ゼロ細胞外膜腫瘍）Ca+2）。最後に、コネキシン-43ノックアウトマウスに由来する居住マクロファージを使用した実験では、ATP誘発性色素摂取が観察されました。したがって、我々の実験データは、in vitroでのマクロファージが機能的ギャップ接合部を形成せず、細胞外ATPによって活性化された透過性経路がヘミガップ接合チャネルによって形成されないことを示しています。

The existence of functional gap junctions in migratory cells of the immune system is a controversial issue. In this report, we have focused on one particular cell type, namely the macrophages, because connexin-43, a protein that forms gap junctions, has been described in peritoneal macrophages and a macrophage cell line (J774), by Northern and Western blot analysis. To test whether these cell types expressed functional gap junctions, we assayed dye coupling by intracellular injection of Lucifer Yellow. We observed that nonstimulated macrophages are not coupled among themselves and did not form functional gap junctions with an epithelial cell line, which expresses functional gap junctions formed by connexin-43. Dye coupling was also not detected between macrophages previously activated by lipopolysaccharide or interferon-gamma. We further examined the presence of functional coupling using the more sensitive technique of dual whole cell patch-clamp, and again, did not find electrical coupling between macrophages, consistent with the dye microinjection data. We also examined the possible presence of hemigap junction channels activated by extracellular adenosine triphosphate (ATP) using a dye uptake assay and the whole cell patch-clamp technique. Conditions expected to close gap junction hemichannels (exposure to octanol and low intracellular pH) did not decrease ATP-induced Lucifer Yellow uptake, whereas conditions expected to increase hemichannel opening either did not affect ATP permeabilization (dibutyryl adenosine monophosphate) or decreased it (zero extracellular CA+2). Finally, in experiments using resident macrophages derived from conexin-43 knockout mice, we observed ATP induced dye uptake. Our experimental data thus indicate that macrophages in vitro do not form functional gap junctions and that the permeability pathway activated by extracellular ATP is not formed by a hemigap junction channel.