エクオリンおよび緑色の蛍光タンパク質を細胞内オルガネラに標的とする

ビクトリアの2つのタンパク質は、細胞内微小環境の特定の記者として機能するために、哺乳類細胞で分子的に操作され、産生されました。Aequorin（AEQ）、Ca（2+） - 敏感な光プロテインは、サイトゾル、核、ミトコンドリアの3つの細胞内位置を標的としました。培地に補綴群を添加することにより活性AEQに再構成された組換えアポタンパク質は、それらのコンパートメント内の[Ca2+]の直接測定を可能にし、したがって、大きな生物学的関心の問題に直接対処します。同じアプローチが、さまざまな細胞内構造の特定の標識（in vivo）に緑色蛍光タンパク質（GFP）に使用されました。GFPはミトコンドリアを標的としていました。組換えタンパク質は、高度に低下する環境で強く蛍光を発揮し、生細胞でこれらのオルガネラを視覚化するための強力なツールを提供し、細胞内標的蛍光プローブの新しいファミリーのプロトタイプを表す可能性があります。

Two proteins of Aequorea victoria were molecularly engineered and produced in mammalian cells, in order to serve as specific reporters of subcellular microenvironments. Aequorin (AEQ), a Ca(2+)-sensitive photoprotein, was successfully targeted to three intracellular locations: cytosol, nucleus and mitochondria. The recombinant apoprotein, reconstituted into active AEQ by the addition of the prosthetic group to the culture medium, allows the direct measurement of [Ca2+] within those compartments, thus directly addressing questions of large biological interest. The same approach was utilized for the green fluorescent protein (GFP) for specific labelling, in vivo, of the various subcellular structures. GFP was targeted to mitochondria: the recombinant protein, strongly fluorescent in a highly reducing environment, provides a powerful tool for visualizing these organelles in living cells, and may represent the prototype of a new family of intracellularly targeted fluorescent probes.