モリブデンおよびセレンを含む酵素におけるモリブドプテリンの同定

セレンは、クロストリジウムバルケリのニコチン酸ヒドロキシラーゼ（NAH）のモリブデン原子と大腸菌のデヒドロゲナーゼH（FDH）を形成します。セレンはセレノシステイン残基のFDHに存在しますが、NAHでは未確認の不安定な補因子で発生します。この論文では、MO含有酵素からのモリブドプテリンの分離と同定の簡単な手順について説明します。モリブドプテリンは、グアニジン - 加塩性塩酸塩を含むタンパク質から放出された後、KBH4で還元され、ヨードアセトアミドでアルキル化され、逆相HPLCカラムで分離されます。カルボキサム - イドメチル化Pterin化合物は、UV分光法と質量分析によってさらに特徴付けられます。FDHにはモリブドプテリングアニンジヌクレオチドが含まれているのに対し、NAHにはモリブドプテリンシトシンジヌクレオチドが含まれていることがわかりました。

Selenium is coordinated to a molybdenum atom in nicotinic acid hydroxylase (NAH) from Clostridium barkeri and formate dehydrogenase H (FDH) from Escherichia coli. Selenium is present in FDH in a selenocysteine residue whereas in NAH in occurs in an unidentified labile cofactor. In this paper we describe a simple procedure for isolation and identification of molybdopterins from Mo-containing enzymes. The molybdopterin, after release from the protein with guanidine-hydrochloride, is reduced with KBH4, alkylated with iodoacetamide and separated on a reverse-phase HPLC column. The carboxam-idomethylated pterin compound is further characterized by UV spectroscopy and mass-spectrometry. We found that FDH contains molybdopterin guanine dinucleotide whereas NAH contains molybdopterin cytosine dinucleotide.