DQAおよびDQBタイピングの単純化されたPCR-SSO手順2つのプローブの1つの膜への同時ハイブリダイゼーション

DQAおよびDQBオリゴタイピングを簡素化するために、DRタイピングに改善されたPCR-SSO手順を適用しました。DQAタイピングには12個のオリゴヌクレオチドプローブ、DQBタイピングに18個を使用しました。同じハイブリダイゼーションと厳しい洗浄条件を必要とするオリゴヌクレオチドプローブは、さまざまなDNAサンプルを含むドットブロット膜と同時ハイブリダイゼーションのペアとして選択されました。各ペアの1つのプローブをジゴキシゲニンで、もう1つのプローブはビオチンで標識しました。ハイブリダイゼーション後、ドットブロット膜をコンジュゲートの混合物とインキュベートしました。対応するDNAプローブの特異的結合は、化学発光基質（CSPD）を使用してX線膜で視覚化され、色素生成基質（TMB）を使用して染色しました。以前にDRタイピングに使用されていたこのアプローチは、DQAおよびDQBオリゴタイピングにも適しており、PCR-SSOタイピングに固有の労働を大幅に削減します。

To simplify DQA and DQB oligotyping, we applied our improved PCR-SSO procedure for DR typing. We used 12 oligonucleotide probes for DQA typing and 18 for DQB typing. Oligonucleotide probes that require the same hybridization and stringent washing conditions were selected as pairs for simultaneous hybridization to a dot-blot membrane containing various DNA samples. One probe of each pair was labeled with digoxigenin and the other with biotin. After hybridization, the dot-blot membranes were incubated with a mixture of conjugates. Specific binding of the corresponding DNA probes was visualized on an X-ray film using a chemiluminescent substrate (CSPD) and by staining using a chromogenic substrate (TMB). This approach, previously employed for DR typing, is also suitable for DQA and DQB oligotyping and significantly reduces the labor inherent in PCR-SSO typing.