乳腺腫瘍細胞におけるP2U受容体の発現クローニングおよびシグナル伝達経路

細胞外適用ATP、UTP、およびUDPは、P2U受容体を介して乳腺細胞の細胞内Ca2+濃度の一時的な増加を誘導します。乳腺腫瘍細胞株MMT060562のP2U受容体をクローン化し、ヒト白血病細胞株K-562で発現しました。乳腺腫瘍細胞P2U受容体の推定されたアミノ酸配列は、マウスNG108-15細胞のものと98％の相同でした。それは、GTP結合タンパク質共役受容体のスーパーファミリーのメンバーでした。ATPとUTPは、乳腺腫瘍細胞とP2U受容体が発現したK562細胞の両方でCa2+およびイノシトール-1,4,5-三リン酸の細胞内濃度の増加を誘導しました。ATPおよびUTPによるイノシトール-1,4,5-三リン酸およびCa2+の産生における用量反応曲線は、一貫して類似していた。GTPの注入は、ATP誘導の外向き電流を促進し、GTPガンマの注入は反復的な外向き電流を誘発しました。百日咳とコレラ毒素の両方は、ATP誘発性カルシウムの増加に影響しませんでした。P2U受容体は、百日咳およびコレラとトキシンに感受性のGTP結合タンパク質と組み合わせて、ホスホイノシチド代謝回転を活性化することが示唆されました。

Extracellularly applied ATP, UTP and UDP induce a transient increase in the intracellular Ca2+ concentration of mammary cells via a P2U receptor. The P2U receptor in the mammary tumor cell line MMT060562 was cloned and expressed in the human leukemia cell line K-562. The deduced amino acid sequence of the mammary tumor cell P2U receptor was 98% homologous with that of mouse NG108-15 cells. It was a member of the superfamily of GTP-binding-protein-coupled receptors. ATP and UTP induced the increase in the intracellular concentrations of Ca2+ and inositol-1,4,5-trisphosphate in both mammary tumor cells and P2U-receptor-expressed K562 cells. Dose-response curves on the production of inositol-1,4,5-trisphosphate and Ca2+ by ATP and UTP were consistently similar. Injection of GTP enhanced the ATP-induced outward current and injection of GTP gamma S induced a repetitive outward current. Both pertussis and cholera toxins did not affect ATP-induced calcium increase. It was suggested that the P2U receptor coupled with pertussis- and cholera-toxin-insensitive GTP-binding proteins and activated phosphoinositide turnover.