顕微鏡におけるフルオレセインの光退色速度に対する三重項励起状態の影響

このレポートの調査は、長寿命の三重項励起状態が顕微鏡におけるフルオレセインの非シングル指数的光退色速度に重要な役割を果たすという光物理学的証拠を提供することを目的としています。実験により、チオールを含む還元剤であるメルカプトエチルアミン（MEAまたはシステアミン）が最も効果的であり、他の一般的に知られているラジカルクエンチャーまたはシングレット酸素スカベンジャーの中で、蛍光量子収量を減らしていないフルオレセインの光退色を抑制する際に、最も効果的であることが実証されました。結合状態でのフルオレセインの光退色に対する保護効果も顕微鏡で見られました。MEAのアンチブリーチング効果により、時間遅延の蛍光分光法とナノ秒レーザーフラッシュ光分解を使用した一連の実験に触れました。結合された結果は、MEAが三重項励起状態と、一重項励起状態に影響を与えることなく、フルオレセインの半酸化ラジカルな型を直接消すことを示しました。フルオレセインのトリプレット寿命は、MEAを添加すると減少しました。顕微鏡におけるフルオレセインの光退色は、フルオレセインの長寿命のトリプレット励起状態の蓄積に関連していること、および三重項励起状態と染色分子を染料分子を一重項の基底状態に回復させるためにフルオレセインの半酸化型を消光することにより、光審査缶に関連していることを実証しました。減らす。

The investigation in this report aimed at providing photophysical evidence that the long-lived triplet excited state plays an important role in the non-single-exponential photobleaching kinetics of fluorescein in microscopy. Experiments demonstrated that a thiol-containing reducing agent, mercaptoethylamine (MEA or cysteamine), was the most effective, among other commonly known radical quenchers or singlet oxygen scavengers, in suppressing photobleaching of fluorescein while not reducing the fluorescence quantum yield. The protective effect against photobleaching of fluorescein in the bound state was also found in microscopy. The antibleaching effect of MEA let to a series of experiments using time-delayed fluorescence spectroscopy and nanosecond laser flash photolysis. The combined results showed that MEA directly quenched the triplet excited state and the semioxidized radical form of fluorescein without affecting the singlet excited state. The triplet lifetime of fluorescein was reduced upon adding MEA. It demonstrated that photobleaching of fluorescein in microscopy is related to the accumulation of the long-lived triplet excited state of fluorescein and that by quenching the triplet excited state and the semioxidized form of fluorescein to restore the dye molecules to the singlet ground state, photobleaching can be reduced.