エヴァンスブルーによる重要な染色によるMDXマウスの異形成筋線維の視覚化：ジストロフィン欠損筋肉におけるアポトーシスの証拠

MDXマウスの骨格筋の筋線維を変性させることは、エヴァンスブルーで重要な染色によって視覚化されました。エヴァンスブルー注射は静脈内注射をし、青繊維として肉眼で見えるように見える筋肉繊維のみを染色し、赤蛍光繊維として顕微鏡的に見えることもあります。エヴァンスブルー染色の筋肉繊維は、ハイパーコンテストまたは分解のいずれかでした。MDXマウスの筋肉繊維とB10対照マウスの筋肉繊維の無傷または再生は、染料で染色されませんでした。エヴァンスの青染色繊維から分離されたDNAは、アガロースゲル電気泳動で約180の塩基対に断片化を示しました。このようなDNAの断片化は、MDXまたはB10マウスの染色されていない筋肉繊維のDNAには見られませんでした。末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（TDT）媒介DUTPニックエンドラベル（TUNEL）陽性筋核もエヴァンスブルー染色筋線維にも見られましたが、染色されていないものではありませんでした。これらの結果は、MDXマウスの筋線維を変性させることで、膜透過性の増加を示し、アポトーシスを受けることを示しています。エヴァンスブルーによる重要な染色は、変性筋線維を区別するだけでなく、ジストロフィン欠損筋肉の生化学的に変性プロセスを研究するためにも役立ちます。この方法は、MDXマウスにおける薬物投与、遺伝子導入、および筋芽細胞移動の治療効果を評価するのにも役立つかもしれません。

Degenerating muscle fibers in the skeletal muscle of mdx mice were visualized by vital staining with Evans blue. Evans blue injected intravenously stained only degenerating muscle fibers which were visible as blue fibers macroscopically and could also be seen as red fluorescent fibers microscopically. Evans blue-stained muscle fibers were either hypercontracted or degrading. Intact or regenerating muscle fibers in mdx mice and muscle fibers in B10 control mice were not stained with the dye. DNA isolated from Evans blue-stained fibers exhibited fragmentation to approximately 180 base pairs on agarose gel electrophoresis. Such DNA fragmentation was not found in DNA from unstained muscle fibers in mdx or B10 mice. Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end-labeling (TUNEL)-positive myonuclei were also found in Evans blue-stained muscle fibers but not in unstained ones. These results indicate that degenerating muscle fibers in the mdx mouse show an increase in membrane permeability and undergo apoptosis. Vital staining with Evans blue is useful not only for distinguishing degenerating muscle fibers, but also for studying the degeneration process biochemically in dystrophin-deficient muscle. This method may also be useful for evaluating the therapeutic effects of drug administration, gene transfer, and myoblast transfer in the mdx mouse.