接続の破壊：細胞間インターフェイスからのデスモソームプラークタンパク質デスモプラキンの変位は、中間フィラメントバンドルの固定を妨害し、細胞間接合部のアセンブリを変化させます

中間フィラメント（IF）ネットワークと膜貫通デスモソームカドヘリンの細胞質尾部の間の接合部に位置するデスモソームプラークタンパク質デスモプラキン（DP）は、デスモソームプラークにリンクするように提案されています。この仮説と一致して、個々のDPドメインの以前の研究は、DP COOH末端がIFネットワークと関連しているのに対し、NH2末端配列はDPとデスモソームプラークと関連することを示しました。それにもかかわらず、デスモソームにアタッチするためにDPが必要であることはまだ実証されていませんでした。この提案を直接テストするために、デスモソームアセンブリ中に内因性DPと競合すると予想されるDP NH2末端ポリペプチドを安定に発現するA431細胞株を生成しました。これらのポリペプチドにはCOOH末端のIF結合ドメインがないため、この競争は、デスモソームプラークにリンクするためにDPが必要な場合、IFアンカレッジの損失をもたらすはずです。このような細胞では、デスモソームタンパク質と細胞細胞界面で共局在する70 kd DP NH2末端ポリペプチド（DP-NTP）が共局在しています。予測されたように、内因性DPの分布はひどく摂動されました。内因性DPが免疫蛍光により検出できなかった細胞細胞の境界では、付着したトンフィブリル（バンドルの場合）が顕著に欠けていました。さらに、DP-NTPは、バンドルの場合に関連する超識別可能な接合部構造に組み立てられました。驚くべきことに、免疫蛍光と免疫ゴールド電子顕微鏡検査は、接着接合部成分がデスモソーム成分とDP-NTPとともにこれらの構造に組み立てられたことを示しました。これらの結果は、デスモソームへのネットワークの場合、アンカーにDPが必要であることを示しており、さらに、DP-IF複合体が、組み立て中の通常の空間分離を異なる構造に支配するために重要であることを示唆しています。

The desmosomal plaque protein desmoplakin (DP), located at the juncture between the intermediate filament (IF) network and the cytoplasmic tails of the transmembrane desmosomal cadherins, has been proposed to link IF to the desmosomal plaque. Consistent with this hypothesis, previous studies of individual DP domains indicated that the DP COOH terminus associates with IF networks whereas NH2-terminal sequences govern the association of DP with the desmosomal plaque. Nevertheless, it had not yet been demonstrated that DP is required for attaching IF to the desmosome. To test this proposal directly, we generated A431 cell lines stably expressing DP NH2-terminal polypeptides, which were expected to compete with endogenous DP during desmosome assembly. As these polypeptides lacked the COOH-terminal IF-binding domain, this competition should result in the loss of IF anchorage if DP is required for linking IF to the desmosomal plaque. In such cells, a 70-kD DP NH2-terminal polypeptide (DP-NTP) colocalized at cell-cell interfaces with desmosomal proteins. As predicted, the distribution of endogenous DP was severely perturbed. At cell-cell borders where endogenous DP was undetectable by immunofluorescence, there was a striking absence of attached tonofibrils (IF bundles). Furthermore, DP-NTP assembled into ultrastructurally identifiable junctional structures lacking associated IF bundles. Surprisingly, immunofluorescence and immunogold electron microscopy indicated that adherens junction components were coassembled into these structures along with desmosomal components and DP-NTP. These results indicate that DP is required for anchoring IF networks to desmosomes and furthermore suggest that the DP-IF complex is important for governing the normal spatial segregation of adhesive junction components during their assembly into distinct structures.