アビジン - ビオチン化学とマトリックス支援レーザー脱着/イオン化質量分析を組み合わせます

ビオチンに対するアビジンの高い親和性に基づく分子認識は、マトリックス支援レーザー脱着/イオン化（MALDI）質量分析と組み合わされています。ビオチン化試薬の豊富な化学は、複雑な混合物におけるビオチン化分析物の迅速かつ敏感な分析のための質量トレーサー法の開発の根底にあります。この方法では、ビオチン化分析物を固定化アビジンアガロースビーズで捕捉します。結合した複合体を備えたビーズは、マルディのサンプルプローブに堆積し、その後、保持された化合物の溶出とビーズの除去が続きます。ビーズの乾燥と組み合わせたマルディマトリックス溶液の使用は、アビジン - ビオチンの相互作用を克服するのに十分であることが示されています。マルディ分析に合わせたいくつかの異なるアビジンビオチン相互作用スキームの研究が提示されています。最適化されたスキームにより、アビジン - ビオチン相互作用の非常に高い選択性が保存され、アビジン - ビオチン相互作用からのみ生じるMALDIスペクトルに生成される種が保存されていることが実証されています。ナノモル範囲のビオチン化種は分離し、この手法で分析できます。

Molecular recognition based on the high affinity of avidin for biotin has been combined with matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) mass spectrometry. The rich chemistry of biotinylation reagents underlies the development of a mass tracer method for the rapid and sensitive analysis of biotinylated analyte in complex mixtures. In this method, the biotinylated analyte is captured with immobilized avidin agarose beads. The beads with the bound complex are deposited on the MALDI sample probe, followed by elution of the retained compounds and removal of the beads. The use of MALDI matrix solutions in conjunction with drying of the beads is shown to be sufficient to overcome the avidin-biotin interaction. The studies of several different avidin-biotin interaction schemes tailored to the MALDI analysis are presented. It is demonstrated that, with an optimized scheme, the extremely high selectivity of the avidin-biotin interaction is preserved, generating species represented in the MALDI spectra that arise only from the avidin-biotin interaction. Biotinylated species in the nanomolar range can be isolated and analyzed with this technique.