核分裂酵母菌類染色物質の組換え菌類菌菌菌の二本鎖分裂誘発性有糸分裂球体再結合pombe

Saccharomyces cerevisiae Ho遺伝子およびMATA切断部位を使用して、Schizosaccharomyces Pombeの染色体内組換え基質内に部位特異的な二本鎖切断（DSB）を導入しました。組換え基質は、ADE6ヘテロアレンの非標準的な直接反復で構成されていました。DSB誘導は、2000倍の組換え因子の頻度を刺激しました。DSB誘発性組換え剤のスペクトルは、ADE6リピートの1つ内にDSBが導入されたのか、それとも一意のDNAに介入したかどうかに依存していました。DSBがユニークなDNA内に導入されたとき、組換えの99.8％以上が介在するDNAを欠いていましたが、野生型またはヘテロアレンのいずれかであるADE6のコピーを1つ保持しました。DSBが重複したDNAに配置された場合、組換え剤の77％は上記の削除型と類似していましたが、単一のADE6コピーは野生型または非カットリピートの排他的でした。誘導組換え体の残りの23％は、ADE6の2つのコピーと介在シーケンスを備えた遺伝子転換体でした。DSBが誘導されたADE6ヘテロアレルは、遺伝情報の受信者でした。半分抑制されたコロニーを分離し、分析し、ヘテロドゥプレックスDNA形成の証拠として解釈しました。結果は、組換えの現在のモデルの観点から議論されています。

The Saccharomyces cerevisiae HO gene and MATa cutting site were used to introduce site-specific double-strand breaks (DSBs) within intrachromosomal recombination substrates in Schizosaccharomyces pombe. The recombination substrates consisted of nontandem direct repeats of ade6 heteroalleles. DSB induction stimulated the frequency of recombinants 2000-fold. The spectrum of DSB-induced recombinants depended on whether the DSB was introduced within one of the ade6 repeats or in intervening unique DNA. When the DSB was introduced within unique DNA, over 99.8% of the recombinants lacked the intervening DNA but retained one copy of ade6 that was wild type or either one of the heteroalleles. When the DSB was located in duplicated DNA, 77% of the recombinants were similar to the deletion types described above, but the single ade6 copy was either wild type or exclusively that of the uncut repeat. The remaining 23% of the induced recombinants were gene convertants with two copies of ade6 and the intervening sequences; the ade6 heteroallele in which the DSB was induced was the recipient of genetic information. Half-sectored colonies were isolated, analyzed and interpreted as evidence of heteroduplex DNA formation. The results are discussed in terms of current models for recombination.