ポリアクリルアミドゲル電気泳動による正常なヒト血漿中のヘパリン様グリコサミノグリカンの検出

このホワイトペーパーでは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（Page）による正常なヒト血漿に存在する内因性ヘパリンの検出を可能にする手順について説明します。血漿はタンパク質分解に提出されました：抗トロンビンIII依存性およびヘパリナーゼIに敏感な抗凝固剤活性が、ダイジェストの上清で実証されました。上清は、濃度のエタノール（25％、50％、60％、および65％がvol。）で連続的な分別に提出されました。画分は、グリコサミノグリカン（GAG）とタンパク質含有量の両方についてページごとに分析されました。ギャグは勾配ページ（24〜30％）で検出されました。60％のエタノール沈殿によって得られた画分には、ヘパリナーゼIに敏感なギャグが含まれていました。GAGがタンパク質と共沈むことを示します。タンパク質分解消化とその後のエタノール分別に起因する材料のSDS-PAGEは、3つの主要な帯域を明らかにしました。これらのペプチドは、主に60％エタノールで得られた画分と血漿ギャグと共沈みました。循環する内因性ヘパリンがそのようなペプチドと相互作用する可能性について説明します。

This paper describes a procedure that allows detection of endogenous heparin present in normal human plasma by polyacrylamide-gel electrophoresis (PAGE). Plasma was submitted to proteolysis: an antithrombin III-dependent and heparinase I-sensitive anticoagulant activity was demonstrated in the supernatant of the digest. The supernatant was submitted to sequential fractionation with increasing concentrations of ethanol (25%, 50%, 60% and 65%, by vol.). Fractions were analyzed by PAGE for both glycosaminoglycan (GAG) and protein content. GAGs were detected by gradient PAGE (24-30%). The fraction obtained by 60% ethanol precipitation contained heparinase I-sensitive GAG. We show that GAGs co-precipitate with proteins. The SDS-PAGE of the material resulting from proteolytic digestion and subsequent ethanol fractionation, revealed three major bands. These peptides co-precipitated with plasma GAGs, mainly with the fraction obtained by 60% ethanol. We discuss the possibility that circulating endogenous heparin interacts with such peptides.