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ヒト胚性腎臓（HEK）細胞で内因的に発現したトロンビンおよびプリン作動性受容体のアゴニスト活性化および安定して発現したM3ムスカリン性アセチルコリン受容体（MACHR）は、MACHR活性化で最も発音されるPLC刺激とともにホスホリパーゼC（PLC）刺激を誘導します。これらの受容体応答は、百日咳毒素（PTX）の非感受性および非加熱性であり、受容体が共通のシグナル伝達経路を共有することを示唆しています。ATPではなくカルバコル（1 mm）によるHEK細胞の短期（2分）前処理は、PLC応答の長期的な（> OR = 90分）感作を引き起こしました。カルバコル処理とウォッシュアウト後30分後、総イノシトールリン酸またはイノシトール-1,4,5-三リン酸のいずれかの形成として測定されたMACHR刺激PLC活性は、1.5-2倍増加しました。トロンビンおよびプリン作動性受容体によるPLC刺激は、約3倍増加しました。さらに、Carbacholの前処理は、それぞれ無傷の細胞および透過化細胞におけるAIF4およびGuanosine-5'-O-（3-THIO） - 三リン酸によるGタンパク質の直接活性化に対するPLC活性の約2.5倍の刺激によっても強化されました。対照的に、HEK細胞溶解物における外因性ホスファチジルイノシトール-4,5-ビスリン酸[PTDNS（4,5）P2]で測定されたPLC活性は変化しておらず、カルバチョル前処理がPTDLNSの細胞レベルを高める可能性があることを示唆しています（4,5）P2。実際、PTDLNS（4,5）P2のレベルは、短期カルバコール治療後30分後にHEK細胞で約50％増加することがわかりましたが、ホスファチジルイノシトールのレベルは変化せず、ホスファチジルイノシトール-4-リン酸のレベルは減少しました（40-50％）。PTXによるHEK細胞の前処理により、M3 MACHR誘発PLC増強が妨げられ、PTDLNS（4,5）P2レベルの上昇が約50％減少しました。結論として、HEK細胞で安定に発現するM3 MACHRの短期アゴニストの活性化は、PTX感受性Gタンパク質とPLC基質供給の強化を含むように、PLCシグナル伝達の長持ちする異種増強につながる可能性があります。
ヒト胚性腎臓（HEK）細胞で内因的に発現したトロンビンおよびプリン作動性受容体のアゴニスト活性化および安定して発現したM3ムスカリン性アセチルコリン受容体（MACHR）は、MACHR活性化で最も発音されるPLC刺激とともにホスホリパーゼC（PLC）刺激を誘導します。これらの受容体応答は、百日咳毒素（PTX）の非感受性および非加熱性であり、受容体が共通のシグナル伝達経路を共有することを示唆しています。ATPではなくカルバコル（1 mm）によるHEK細胞の短期（2分）前処理は、PLC応答の長期的な（> OR = 90分）感作を引き起こしました。カルバコル処理とウォッシュアウト後30分後、総イノシトールリン酸またはイノシトール-1,4,5-三リン酸のいずれかの形成として測定されたMACHR刺激PLC活性は、1.5-2倍増加しました。トロンビンおよびプリン作動性受容体によるPLC刺激は、約3倍増加しました。さらに、Carbacholの前処理は、それぞれ無傷の細胞および透過化細胞におけるAIF4およびGuanosine-5'-O-（3-THIO） - 三リン酸によるGタンパク質の直接活性化に対するPLC活性の約2.5倍の刺激によっても強化されました。対照的に、HEK細胞溶解物における外因性ホスファチジルイノシトール-4,5-ビスリン酸[PTDNS（4,5）P2]で測定されたPLC活性は変化しておらず、カルバチョル前処理がPTDLNSの細胞レベルを高める可能性があることを示唆しています（4,5）P2。実際、PTDLNS（4,5）P2のレベルは、短期カルバコール治療後30分後にHEK細胞で約50％増加することがわかりましたが、ホスファチジルイノシトールのレベルは変化せず、ホスファチジルイノシトール-4-リン酸のレベルは減少しました（40-50％）。PTXによるHEK細胞の前処理により、M3 MACHR誘発PLC増強が妨げられ、PTDLNS（4,5）P2レベルの上昇が約50％減少しました。結論として、HEK細胞で安定に発現するM3 MACHRの短期アゴニストの活性化は、PTX感受性Gタンパク質とPLC基質供給の強化を含むように、PLCシグナル伝達の長持ちする異種増強につながる可能性があります。
Agonist activation of thrombin and purinergic receptors endogenously expressed in human embryonic kidney (HEK) cells and of the stably expressed m3 muscarinic acetylcholine receptor (mAChR) induces phospholipase C (PLC) stimulation, with the most pronounced PLC stimulation observed on mAChR activation. These receptor responses were pertussis toxin (PTX) insensitive and nonadditive, suggesting that the receptors share common signaling pathways. Short term (2 min) pretreatment of HEK cells with carbachol (1 mM), but not ATP, followed by agonist washout, caused a long-lasting (> or = 90 min) sensitization of PLC responses. At 30 min after carbachol treatment and washout, mAChR-stimulated PLC activity, measured as formation of either total inositol phosphates or of inositol-1,4,5-trisphosphate, was enhanced by 1.5-2-fold. PLC stimulation by thrombin and purinergic receptors was increased by approximately 3-fold. Furthermore, carbachol pretreatment also enhanced, by approximately 2.5-fold, stimulation of PLC activity on direct activation of G proteins by AIF4- and guanosine-5'-O-(3-thio)-triphosphate in intact and permeabilized cells, respectively. In contrast, PLC activities, measured with exogenous phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate [Ptdns(4,5)P2] in HEK cell lysates, were not altered, suggesting that carbachol pretreatment may enhance the cellular level of Ptdlns(4,5)P2. Indeed, the level of Ptdlns(4,5)P2 was found to be increased by approximately 50% in HEK cells 30 min after short term carbachol treatment, whereas the level of phosphatidylinositol was not altered and that of phosphatidylinositol-4-phosphate decreased (by 40-50%). Pretreatment of HEK cells with PTX prevented the m3 mAChR-induced PLC potentiation and reduced the elevation in Ptdlns(4,5)P2 level by approximately 50%. In conclusion, short term agonist activation of m3 mAChRs stably expressed in HEK cells can lead to a longlasting heterologous potentiation of PLC signaling, which processes apparently involve PTX-sensitive G proteins and an enhanced PLC substrate supply.
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