2D NMR分光法により決定されたCryptococcus neoformans Cap70からのO-脱アセチル化グルクロノキシロマンナンの構造

日和見病原体であるCryptococcus Neoformansは、AIDS患者の4番目の主要な死因です。酵母のカプセルは主要な毒性因子であり、血清型は、そのcaps膜多糖であるグルクロノキシロマンナン（GXM）の化学構造に関連しています。血清型d分離株B-3501の胚の甲状腺機能変異体であるCAP70のGXMは、化学分析と2D NMR分光法によって調査されました。O-脱アセチル化多糖の1時間および13C化学シフトの割り当ては、DQF-Cosy、Tocsy、および勾配強化HSQCスペクトルの分析から達成されました。グリコシル残基の配列と連鎖位置は、NoesyとRoesy Spectraによって決定されました。2つの繰り返し多糖成分が、ほぼ等しい割合で次の構造を持っていると特定されました。五糖2は、B-3501および他の血清型D分離株の主要なGXMポリマーであることが知られています。六糖1は初めて同定されますが、その後他のC. neoformans分離株で同定されました。CAP70のGXMに1の存在は、分離B-3501に比べて見られる余分なキシロースと一致しています。マンノース：キシロース：グルクロン酸：CAP70 GXMのO-アセチルモル比は3.00：1.73：0.78：1.75ですが、B-3501およびその他の血清型分離株の同じ比率は約3.00：1.00：0.80：1.75です。メチル化分析により、CAP70のGXMには、0.87：1.75：0.38の比率で、装備されていない、単装置（2リンク）、および放棄された（2リンクおよび4リンク）マンノースが含まれていることが確認されました。ドットブロットイムノアッセイは、Cap70が親株のような血清型D分離株であることを示しています。

Cryptococcus neoformans, an opportunistic pathogen, is the fourth leading cause of death among AIDS patients. The yeast's capsule is a major virulence factor, and serotype is related to the chemical structure of glucuronoxylomannan (GXM), its capsular polysaccharide. The GXM from Cap70, a hypocapsular mutant of serotype D isolate B-3501, was investigated by chemical analysis and 2D NMR spectroscopy. The assignment of 1H and 13C chemical shifts for the O-deacetylated polysaccharide was accomplished from the analysis of DQF-COSY, TOCSY, and gradient-enhanced HSQC spectra. The sequence and linkage positions of glycosyl residues were determined by NOESY and ROESY spectra. Two repeating polysaccharide components were identified as having the following structures in approximately equal proportions: [formula: see text] It is not known if these repeating units comprise a single or two separate polymer chains. Pentasaccharide 2 has been known to be the major GXM polymer of B-3501 and other serotype D isolates. Hexasaccharide 1 is identified for the first time although it has subsequently been identified in other C. neoformans isolates. The presence of 1 in the GXM of Cap70 is consistent with the extra xylose found relative to that in isolate B-3501. The mannose:xylose:glucuronic acid:O-acetyl molar ratio of Cap70 GXM is 3.00:1.73:0.78:1.75, while the same ratio for B-3501 and other serotype D isolates is approximately 3.00:1.00:0.80:1.75. Methylation analysis confirmed that the GXM of Cap70 contains unsubstituted, monosubstituted (2-linked), and disubstituted (2- and 4-linked) mannose in a ratio of 0.87:1.75:0.38. Dot blot immunoassay indicates that Cap70 is a serotype D isolate like its parent strain.