Autographa californica核多面体症ウイルスのすぐに初期の遺伝子プロモーターに由来するバキュロウイルスベクター

ネオマイシン抵抗性（NEO）遺伝子が、P10遺伝子座でAutographa californica核多面体症ウイルス（ACMNPV）IE1遺伝子プロモーターのコピーの制御下にあるトランスファーベクターが構築されました。誘導ベクターと感染性ACMNPV DNAを伴うSpodoptera frugiperda（SF9）細胞の同時トランスフェクションの後、組換えウイルスを含むNEO遺伝子は、共骨動物からの混合前駆細胞の連続通過によって選択されました。これは、成長培地のG418の存在下で低MOIで行われ、その後に希釈が制限されました。RNA DOTハイブリダイゼーションは、感染したSF9細胞で、NEO遺伝子がすぐに早期から非常に後期に転写されたことを示しました。これらの結果は、新しいバキュロウイルスベクターシステムが感染した細胞で構築されたことを示しています。さらに、陽性組換えバキュロウイルスを選択するための新しい方法が開発されました。

A transfer vector was constructed in which the neomycin resistance (neo) gene was under the control of a copy of Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcMNPV) IE1 gene promoter at the p10 locus. After cotransfection of Spodoptera frugiperda (Sf9) cells with the transfer vector and infectious AcMNPV DNA, the recombinant virus-containing neo gene was selected by serial passage of the mixed progenies from cotransfection. This was done at low MOI in the presence of G418 in growth medium and was followed by limited dilution. RNA dot hybridization showed that the neo gene was transcribed from immediately early phase to very late phase, in infected Sf9 cells. These results demonstrate that a new baculovirus vector system had been constructed in infected cells. Furthermore, a new method for selection of positive recombinant baculovirus had been developed.