FLPとCREリコンビナーゼのさまざまな熱実験剤：適用された部位固有の組換えへの影響

サイト固有のリコンビナーゼを使用したゲノム操作は、生きているシステムに適用された特性に依存しています。適用された特性を最適に展開できるように理解するために、2つのアッセイでリコンビナーゼFLPとCREを比較しました。大腸菌とin vitroの両方で、FLPはCREとは異なる温度が最適であることを示しています。FLPはより熱電子緩やかで、30度近くに最適であり、39度を超える検出可能な活動はほとんどありません。FLP熱可可能と一致して、リガンド制御されたFLPアンドロゲン受容体融合タンパク質によって媒介される哺乳類細胞株の組換えは、高温よりも35度Cでより効率的です。また、市販のFLPプラスミド（FLP-F70L）に突然変異を記録し、このリコンビナーゼをさらに熱硬化させます。FLP、FLP-F70L、CREの異なる温度最適化は、使用戦略に影響を与えます。私たちの結果は、効率的な組換えを必要とするマウスの用途にCREを使用することを推奨しています。FLPおよびFLP-F70Lの熱電極は、機能および細胞培養アプリケーションの獲得に有用に活用される可能性があります。

Genomic manipulations using site-specific recombinases rely on their applied characteristics in living systems. To understand their applied properties so that they can be optimally deployed, we compared the recombinases FLP and Cre in two assays. In both Escherichia coli and in vitro, FLP shows a different temperature optimum than Cre. FLP is more thermolabile, having an optimum near 30 degrees C and little detectable activity above 39 degrees C. Cre is optimally efficient at 37 degrees C and above. Consistent with FLP thermolability, recombination in a mammalian cell line mediated by a ligand- regulated FLP-androgen receptor fusion protein is more efficient at 35 degrees C than at higher temperatures. We also document a mutation in a commercially available FLP plasmid (FLP-F70L) which renders this recombinase even more thermolabile. The different temperature optima of FLP, FLP-F70L and Cre influence their strategies of usage. Our results recommend the use of Cre for applications in mice that require efficient recombination. The thermolabilities of FLP and FLP-F70L can be usefully exploited for gain of function and cell culture applications.