ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）希釈乳におけるリステリアモノサイトゲンの検出およびカルシウムイオンによるPCR阻害の逆転

リステリアモノサイトゲネスのDNAは、この調査のモデルシステムとして使用され、リステリオリシンO遺伝子に基づいたPCRプライマーを使用しました。標準的なポリメラーゼ連鎖反応（PCR）条件下で、事前の治療なしでは、5％以上の牛乳の存在下で増幅が失敗しました。PCRの阻害は、完全脂肪、半脂肪、脂肪のない牛乳を含む同じ牛乳濃度で発生したため、阻害は牛乳の脂肪含有量に起因しませんでした。しかし、カルシウムイオンは、PCR阻害の主要な供給源として同定されました。結果は、カルシウムイオンと牛乳の阻害効果が、PCRに通常必要とされる標準レベルを大きく上回る反応におけるマグネシウム濃度を増加させることにより、部分的に逆転できることを実証しました。この研究は、食物病原体の直接検出におけるPCRの使用に重要な意味を持っています。

DNA from Listeria monocytogenes was used as the model system from this investigation, with PCR primers based on the listeriolysin O gene. Under standard polymerase chain reaction (PCR) conditions and with no prior treatment, amplification failed in the presence of more than 5% milk. Since inhibition of the PCR occurred at the same milk concentrations with full fat, half fat and fat-free milk, inhibition was not attributed to the fat content of the milk. Calcium ions were, however, identified as a major source of PCR inhibition. The results demonstrated that the inhibitory effects of calcium ions and milk could be partially reversed by increasing the magnesium concentration in the reaction to well above the standard levels normally required for PCR. This work has important implications for the use of the PCR in the direct detection of food pathogens.