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PCR技術の臨床的価値は、改善された定量的方法論の開発により増加します。電気化学的微量（ECL）と生物発光（BL）の2つの新しい方法が、特定のDNAの定量の分析的動的範囲、感度、および再現性について評価されました。2つのアッセイは、1つのビオチン化された前方プライマーを使用して増幅されたIL-2テンプレートDNAを使用して比較され、2つの異なる方法でラベル付けされたシーケンス同一プローブで検出されました。PCR産物は、BL用のストレプトアビジンでコーティングされたプレートで、およびECL用のストレプトアビジンでコーティングされたビーズによって捕獲されました。製品の検出は、ルテニウム（ECL）またはジゴキシゲニン標識プローブ（BL）のいずれかを使用して達成されました。ECL測定は、Perkin Elmer QPCR System 5000を使用して実行されましたが、BL方法論ではSealife Science Aqualite Aequorin-Antibody Congugateを使用して、ML3000ルモメーターで検出されました。両方の機器は、アトモール範囲のラベルの正確な定量化により非常に敏感であることがわかったため、PCR増幅の指数段階での検出が可能になりました。私たちの手では、BLテクノロジーを使用して、ECLを使用して1.5 x 10（14）コピー（18サイクル）のIL-2 PCR産物を使用し、1 x 10（13）コピー（14サイクル）を検出することができました。全体として、BLアッセイは、幅広い潜在的な分析アプリケーションでPCR生成製品を定量化するための迅速で敏感で安価な方法であることがわかりました。
PCR技術の臨床的価値は、改善された定量的方法論の開発により増加します。電気化学的微量（ECL）と生物発光（BL）の2つの新しい方法が、特定のDNAの定量の分析的動的範囲、感度、および再現性について評価されました。2つのアッセイは、1つのビオチン化された前方プライマーを使用して増幅されたIL-2テンプレートDNAを使用して比較され、2つの異なる方法でラベル付けされたシーケンス同一プローブで検出されました。PCR産物は、BL用のストレプトアビジンでコーティングされたプレートで、およびECL用のストレプトアビジンでコーティングされたビーズによって捕獲されました。製品の検出は、ルテニウム（ECL）またはジゴキシゲニン標識プローブ（BL）のいずれかを使用して達成されました。ECL測定は、Perkin Elmer QPCR System 5000を使用して実行されましたが、BL方法論ではSealife Science Aqualite Aequorin-Antibody Congugateを使用して、ML3000ルモメーターで検出されました。両方の機器は、アトモール範囲のラベルの正確な定量化により非常に敏感であることがわかったため、PCR増幅の指数段階での検出が可能になりました。私たちの手では、BLテクノロジーを使用して、ECLを使用して1.5 x 10（14）コピー（18サイクル）のIL-2 PCR産物を使用し、1 x 10（13）コピー（14サイクル）を検出することができました。全体として、BLアッセイは、幅広い潜在的な分析アプリケーションでPCR生成製品を定量化するための迅速で敏感で安価な方法であることがわかりました。
The clinical value of PCR technology would be increased by development of improved quantitative methodology. Two new methods, electrochemiluminescence (ECL) and bioluminescence (BL), were evaluated for analytical dynamic range, sensitivity, and reproducibility of quantitation of specific DNA. The two assays were compared using an IL-2 template DNA amplified using one biotinylated forward primer and detected with sequence identical probes labeled in two different ways. PCR products were, captured on streptavidin-coated plates for BL and by streptavidin-coated beads for ECL. Product detection was accomplished using either a ruthenium (ECL) or a digoxigenin-labeled probe (BL). The ECL measurement was performed using the Perkin Elmer QPCR System 5000, while the BL methodology used a SeaLife Science AquaLite Aequorin-antibody conjugate, which was detected with a ML3000 luminometer. Both instruments were found to be extremely sensitive with accurate quantitation of label in the attomole range, allowing detection during the exponential phase of PCR amplification. In our hands, it was possible to detect 1.5 x 10(14) copies (18 cycles) of IL-2 PCR product using ECL and 1 x 10(13) copies (14 cycles) using BL technology. Overall, we found the BL assay to be a rapid, sensitive, and inexpensive way to quantitate PCR-generated products with a broad range of potential analytical applications.
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