マウスマクロシアリンとヒトCD68の細胞表面発現と、酸化された低密度リポタンパク質のマクロファージ受容体としての役割

ランプファミリーのメンバーであるマクロシアリン（MS）として、マウスマクロファージの94〜9 kDa酸化低密度リポタンパク質（LDL）結合タンパク質を以前に特定しました。以前の免疫染色研究では、MSとそのヒトホモログであるCD68が主に細胞内タンパク質であることが示されています。ただし、フローサイトメトリー（FACS）や細胞表面特異的なビオチン化などの機密技術を使用して、これらのタンパク質の有意な表面発現があることを示しています。MAB FA/11を使用した無傷の細胞のFACS分析は、居住マウス腹膜マクロファージにおけるMSの小さいが明確な表面発現を示しましたが、これはチオグリコレートの誘発により大幅に強化されました。無傷の細胞のビオチン化と免疫沈降がそれに続く洗剤溶解細胞調製物のビオチン化により、原形質膜上の誘発マクロファージの総MS含有量の10〜15％が明らかになりました。未処理の生の264.7細胞でも同様の結果が得られました。無傷のTHP-1単球細胞のFACS分析では、非活性化細胞（総細胞含有量の4％）でのCD68の表面発現が最小限であることが示されました。ホルボール12-ミリステート13-アセテートによる刺激は、表面と総CD68の両方の発現を大幅に増加させました。さらに、4度Cでの特異的結合と、活性化されたTHP-1細胞による125i標識LDLの37度Cでの37度Cでの取り込みは、CD68 MABS KP-1およびEBM-11により30〜50％阻害されました。したがって、定常状態でのMS/CD68の表面発現は、総細胞含有量のわずかな割合しか表していませんが、これらのタンパク質はin vitroで活性化されたマクロファージによって酸化LDL取り込みに重要な役割を果たすことができ、アテローム性動脈硬化症の泡細胞形成に寄与する可能性があります。病変。

We have previously identified a 94- to 97-kDa oxidized low density lipoprotein (LDL)-binding protein in mouse macrophages as macrosialin (MS), a member of the lamp family. Earlier immunostaining studies have shown that MS and its human homolog, CD68, are predominantly intracellular proteins. However, using sensitive techniques such as flow cytometry (FACS) and cell-surface-specific biotinylation, we now show that there is significant surface expression of these proteins. FACS analysis of intact cells using mAb FA/11 showed small but definite surface expression of MS in resident mouse peritoneal macrophages but this was greatly enhanced with thioglycollate elicitation. Biotinylation of intact cells and detergent-solubilized cell preparations followed by immunoprecipitation revealed 10-15% of the total MS content of elicited macrophages on the plasma membrane. Similar results were obtained with untreated RAW 264.7 cells. FACS analysis of intact THP-1 monocytic cells showed minimal surface expression of CD68 on unactivated cells (4% of total cell content). Stimulation with phorbol 12-myristate 13-acetate increased both surface and total CD68 expression considerably. Furthermore, the specific binding at 4 degrees C and uptake at 37 degrees C of 125I-labeled oxidized LDL by activated THP-1 cells was inhibited by 30-50% by CD68 mAbs KP-1 and EBM-11. Thus, although the surface expression of MS/CD68 at steady-state represents only a small percentage of their total cellular content, these proteins can play a significant role in oxidized LDL uptake by activated macrophages in vitro and could contribute to foam cell formation in atherosclerotic lesions.