ヒト血液CD34+細胞の陽性選択のためのCD14+細胞を枯渇させるための迅速なナイロン繊維シリンジシステム免疫磁性ミクロスフェアの使用

CD34+細胞の迅速かつ効率的な精製を実現するために、ナイロン繊維シリンジ（NF-S）を考案し、それを操作して正常なヒト血液細胞（MN細胞）から接着細胞を枯渇させました。NF-Sで処理された細胞は、CD34モノクローナル抗体、免疫磁気ミクロスフェア、キモパペイン処理を使用して、ミクロスフェアを分離するCD34+画分としてさらに精製しました。定常状態のヒト末梢血細胞を24度CでNF-Sで5分間処理した場合、単球（CD14 +細胞）の頻度は22.0 +/- 5.2％から2.5 +/- 0.4％に大幅に減少し、CD34+細胞の73％の回収。その後の免疫磁気陽性選択は、86 +/- 23％の収率で91 +/- 8％純粋なCD34 +細胞の準備を達成しました。CD34 +細胞の全体的な収量は44 +/- 11％であり、すべての手順に必要な時間は5時間でした。初期細胞集団におけるCD14+細胞の頻度と最終準備でのCD34+細胞の純度の間には、緊密で逆相関がありました（p <0.0001）。90％を超える純粋なCD34+細胞の製剤を達成するためのCD14+細胞の推奨頻度は4.4％未満でした。NF-Sと免疫磁気ミクロスフェアを組み合わせると、定常状態のCD34+細胞の効率的なベンチトップ分離は、どの実験室でも行うことができ、蛍光活性化細胞ソルティングは必要ありません。

To achieve a rapid and an efficient purification of CD34+ cells, we devised a nylon-fiber syringe (NF-S) and we manipulated it to deplete adherent cells from normal human blood mononuclear cells (MN cells). The cells processed by NF-S were further purified as the CD34+ fraction, using CD34 monoclonal antibody, immunomagnetic microspheres and chymopapain treatment to detach the microspheres. When steady-state human peripheral blood MN cells were processed by NF-S at 24 degrees C for 5 min, the frequency of monocytes (CD14+ cells) significantly decreased from 22.0 +/- 5.2% to 2.5 +/- 0.4%, with a 73% recovery of CD34+ cells. The subsequent immunomagnetic positive selection achieved preparations of 91 +/- 8% pure CD34+ cells with a 86 +/- 23% yield. The overall yield of CD34+ cells was 44 +/- 11%, and the time required for all procedures was 5 h. There was a tight and an inverse correlation (P < 0.0001) between the frequency of CD14+ cells in the initial cell population and the purity of CD34+ cells in the final preparation. A recommended frequency of CD14+ cells for achieving preparations of over 90% pure CD34+ cells was less than 4.4%. When combining NF-S and immunomagnetic microspheres, efficient bench-top separation of CD34+ cells in steady-state peripheral blood can be done in any laboratory, and fluorescence-activated cell-sorting is not required.