ヒト血清アルブミンの熱展開の熱力学的特徴

ヒト血清アルブミン（HSA）の展開プロセスは、タンパク質の天然蛍光、アルブミンのヒドロラーゼ活性の熱不活性化、およびプリバロフによって開発された高感度カロリメーターを使用した微分走査熱量測定に対する熱効果によって研究されました。変性プロセスは、アイリングとラマリーのモデルの近似によって説明できます。ネイティブ[シンボル：テキストを参照]折りたたまれた可逆的[シンボル：テキストを参照]展開されます。不可逆的なステップの速度は非常に遅い（74度以下の温度で）、2つの状態近似に基づいて変性プロセスの解像度を可逆的なものとして可能にすることがわかった。ただし、74度Cを超える温度での熱変性プロセスにおける分子内協力の存在は破棄できず、アルブミン分子の凝集を好む可能性があります。差動スキャン熱量測定によって得られた展開の中間温度は、pH 7.4で63.1度C +/- 0.4でした。この値はスキャン速度とは無関係であり、タンパク質蛍光やアルブミンのヒドロラーゼ活性に対する熱効果などの技術によって得られたものと一致しています。pH 7.4での展開のエンタルピーは88.9 +/- 4 kcal/molでした。この値は、他のタンパク質で得られたものと比較して低く、アルブミンの展開経路に溶融球の存在を示唆しています。アルブミンの中性基底立体構造変化（pH 7.4）は、タンパク質の熱安定性と変性のエンタルピーを修正しませんでした。4.3未満のpH（遷移酸中立）46.2度C +/- 0.9のTMを持つアルブミンのサーモグラムに2番目のピークが存在することは、展開中のアルブミンのさまざまなドメイン間の協同性の失われたことを示唆しています。

The unfolding process of human serum albumin (HSA) was studied by thermal effect on the native fluorescence of the protein, thermal inactivation of the hydrolase activity of albumin and differential scanning calorimetry using the high sensitive calorimeter developed by Privalov. The denaturation process can be described by an approximation of the model of Eyring and Lumry: native [symbol: see text] unfolded reversible [symbol: see text] unfolded irreversible. It was found that the rate of irreversible step was very slow (at temperatures below 74 degrees C), allowing the resolution of the denaturation process as a reversible one on the basis of two states approximation. However, the presence of intramolecular cooperation in the thermal denaturation process at temperatures above 74 degrees C cannot be discarded, which might be favoring the aggregation of albumin molecules. The midpoint temperature of unfolding obtained by differential scanning calorimetry was of 63.1 degrees C +/- 0.4 at pH 7.4. This value was independent of the rate of scanning and it is in agreement with those obtained by techniques such as thermal effect on the protein fluorescence and on the hydrolase activity of albumin. The enthalpy of unfolding at pH 7.4 was 88.9 +/- 4 Kcal/mol. This value was low compared with those obtained for other proteins, suggesting the presence of a molten globule in the unfolding pathway of albumin. The neutral-basic conformational change (pH 7.4) of albumin did not modify the thermal stability and the enthalpy of denaturation of the protein. A pH below 4.3 (transition acid-neutral) the presence of a second peak in the thermogram of albumin with a TM of 46.2 degrees C +/- 0.9 would be suggesting a lost of cooperativity between the various domains of albumin in the unfolding.