ADPによる窒素酵素MoFEタンパク質の共有結合修飾

mgadp-は、肺炎菌（KP1）のニトロゲナーゼモリブデン鉄（MOFE）タンパク質と2時間にわたって反応して、安定した触媒活性類似物を生成しました。分離されたタンパク質は、-1 p.p.mで新しい幅広い31p NMR共鳴を示しました。リンJカップリングがない。[8-14C] ADPのアデニンリングは、共役に関連したままでした。共有結合したヌクレオチドは、NMRおよびTLCによってAMPとして同定されました。MGADPに対するKP1の拡張透析は、タンパク質表面でさらにAMP結合をもたらしました。ADPは当初、AMPサイトとは異なるサイトでKP1にしっかりと結びついていました。ATPはADPを置き換えませんでした。KP1-AMPの形成の時間経過は、ニトロゲナーゼ鉄タンパク質（KP2）によって変化し、酸化還元電位に依存していました。KP1 -AMPは、-350 mVのフェリシアニドイオンによる濃度および酸化に安定していた。6時間の期間にわたるKP1-AMPのゆっくりとした加水分解により、AMPと変化のないKP1が得られました。ADPのアデニン環は、N2下での還元剤制限窒素酵素の還元剤制限された代謝回転中にMGATP2-のアデニンと交換し、15度CでのATP加水分解の可逆性を示しています[32P] PIは、KP1とのインキュベーションとのADPおよびATPの両方の末端リン酸グループと交換されました。。32P交換とKP1の触媒活性は、リジン変化試薬の20倍のモル過剰であるO-fthalaldehyde（OPT）によって阻害されました。MGADPによるプレインキュベーション - オプトの不活性化から保護されています。窒素ゲノゼFeタンパク質の推定疎水性ドッキング部位の近くのMoFEタンパク質のアルファ鎖上の2つの潜在的に活性的なリジン残基が、OPTおよびヌクレオチド結合の部位として提案されています。Azotobacter Vinelandii Mofeタンパク質（AV1）もAMP付加物を形成しましたが、KP2は形成しませんでした。カタラーゼはADPと相互作用しませんでした。ニトロゲナーゼMoFEタンパク質とアデニンヌクレオチドとの反応は、既知のタンパク質ヌクレオチド相互作用に対応するものではありません。

MgADP- reacted with the nitrogenase molybdenum-iron (MoFe) protein of Klebsiella pneumoniae (Kp1) over a period of 2 h to yield a stable, catalytically active conjugate. The isolated protein exhibited a new, broad 31P NMR resonance at -1 p.p.m. lacking phosphorus J coupling. The adenine ring of [8-14C]ADP remained associated with the conjugate. A covalently bound nucleotide was identified as AMP by NMR and TLC. Extended dialysis of Kp1 against MgADP- resulted in further AMP binding at the protein surface. ADP was initially bound tightly to Kp1 at a site distinct from the AMP sites. ATP did not replace ADP. The time course of the formation of the Kp1-AMP was altered by the nitrogenase iron protein (Kp2) and was dependent on redox potential. Kp1-AMP was stable to concentration and oxidation with ferricyanide ion at -350 mV. Slow hydrolysis of Kp1-AMP over a period of 6 h yielded AMP and unaltered Kp1. The adenine ring of ADP exchanged with adenine of MgATP2- during reductant-limited turnover of nitrogenase under N2, indicating reversibility of ATP hydrolysis at 15 degrees C. [32P]Pi exchanged with the terminal phosphate group of both ADP and ATP on incubation with Kp1. 32P exchange and the catalytic activity of Kp1 were inhibited by a 20-fold molar excess of the lysine-modifying reagent, o-phthalaldehyde (OPT). Preincubation with MgADP- protected against OPT inactivation. Two potentially reactive lysine residues on the alpha chain of the MoFe protein near a putative hydrophobic docking site for the nitrogenase Fe protein are proposed as sites of OPT and nucleotide binding. Azotobacter vinelandii MoFe protein (Av1) also formed an AMP adduct but Kp2 did not. Catalase did not interact with ADP. The reactions of the nitrogenase MoFe protein with adenine nucleotides have no counterpart in known protein-nucleotide interactions.