エンドウチコチルミクロソームからのキシログルカンガラクトシルおよびフコシルトランスフェラーゼ活性

エンドウ豆（pisum sativum L.）の成長組織からのミクロソーム膜は、潜在的なガラクトシル受容体としてタマリンド種子キシログルカン（xg）を伴うまたは伴わないまたはなしで、基質udp- [14c]ガラクトース（gal）とインキュベートしました。Tamarind Seed XGの強化された[14C] GALの強化された組み込みは、トリクロロ酢酸可溶性でしたが、67％エタノールに不溶性でした。これらの製品は、セルラーゼによってXGサブユニットのオリゴ糖に匹敵する断片に加水分解されました。Xg依存性ガラクトシルトランスフェラーゼ活性は、Xgフコシルトランスフェラーゼとともに、洗剤3- [（3-コラミドロピル） - ジメチルアンモニオ] -1-プロパンスルホン酸塩によって溶解する可能性があります。この酵素をTamarind（Tamarindus Indica L.）種子XGまたはナストルチウム（Tropaeolum Majus L.）でインキュベートした場合、XG特異的ベータガラクトシダーゼで部分的に等溝化された種子XGは、GAL移動速度が増加し、フコース伝達の速度は減少しました。ネイティブXGのコントロール付き。反応産物は、セルラーゼによって14Cフラグメントに加水分解され、ゲルろ過と高速液体クロマトグラフィーの分別がパルスしたアンペロメトリック検出と分析されました。主要な成分は、XGサブユニット、つまり2つの可能なモノガラクトシルオクタサク糖（-XXLG-）とジガラクトシル非アサクチル（-XLLG-）の1つでした。受容体の主要な八糖類がXXLG（Tamarind Seed XGのように）またはXLXGの場合（AS）Nasturtium Seed XG）。サブユニットの還元端からの最初のキシロシルグルコースは、溶解したPEAトランスフェラーゼが好むGALアクセプター軌跡であると結論付けられています。これらの観察結果は、細胞壁XGの生合成のモデルに組み込まれています。

Microsomal membranes from growing tissue of pea (Pisum sativum L.) epicotyls were incubated with the substrate UDP-[14C]galactose (Gal) with or without tamarind seed xyloglucan (XG) as a potential galactosyl acceptor. Added tamarind seed XG enhanced incorporation of [14C]Gal into high-molecular-weight products (eluted from columns of Sepharose CL-6B in the void volume) that were trichloroacetic acid-soluble but insoluble in 67% ethanol. These products were hydrolyzed by cellulase to fragments comparable in size to XG subunit oligosaccharides. XG-dependent galactosyltransferase activity could be solubilized, along with XG fucosyltransferase, by the detergent 3-[(3-cholamidopropyl)-dimethylammonio]-1-propanesulfonate. When this enzyme was incubated with tamarind (Tamarindus indica L.) seed XG or nasturtium (Tropaeolum majus L.) seed XG that had been partially degalactosylated with an XG-specific beta-galactosidase, the rates of Gal transfer increased and fucose transfer decreased compared with controls with native XG. The reaction products were hydrolyzed by cellulase to 14C fragments that were analyzed by gel-filtration and high-performance liquid chromatography fractionation with pulsed amperometric detection. The major components were XG subunits, namely one of the two possible monogalactosyl octasaccharides (-XXLG-) and digalactosyl nonasaccharide (-XLLG-), whether the predominant octasaccharide in the acceptor was XXLG (as in tamarind seed XG) or XLXG (as in nasturtium seed XG). It is concluded that the first xylosylglucose from the reducing end of the subunits was the Gal acceptor locus preferred by the solubilized pea transferase. These observations are incorporated into a model for the biosynthesis of cell wall XGs.