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緑膿菌は、ヒト内皮細胞によって選択的に内在化されていますが、細胞内（IC）コンパートメントで効率的に殺されません。IC生存が細菌を含むエンドソーム - リソソーム（E-L）融合の失敗に関連しているかどうかを調査するために、内皮細胞はアルブミンコロイド型の金錯体および細菌懸濁液にさらされ、透過型電子顕微鏡（TEM）に提出されました。緑膿菌を含む液胞で金顆粒が検出され、E-L融合が発生したことを示しています。細菌も細胞の細胞質では自由に見られ、エンドソーム膜の破壊を示唆しています。ホスホリパーゼC（PLC）が液胞性溶解を説明できるかどうかを確認するために、PLC産生PAO1およびPAK株を、IC生存においてPLC欠損変異体（PLCN）と比較しました。ゲンタマイシン除外アッセイによって決定されるように、3つの株はすべて、内皮細胞によって等しく取り付けられました。3時間の感染後、PAKとPAO1のIC濃度は有意に増加しましたが、変異体の濃度は感染の1時間で実行可能なカウントの56.8 +/- 18.2％に減少しました。5時間後、緑膿菌のIC濃度は、PAK、PAO1、および変異体について、1時間で検出された実行可能なカウントの83.1 +/- 34.6％、109 +/- 22.6％、26.2 +/- 14.7％に相当しました。それぞれ。TEMによって、ほとんどのPao1を含む液胞は部分的に溶解した膜を呈したが、PLCN変異細菌に感染した細胞では、無傷の膜を持つ液胞で最も頻繁に観察された。これらの観察結果は、緑膿菌のIC生存が、E-L融合後の内皮細胞の微生物活性とエンドソームから逃げる細菌の能力との間の競合に起因することを示唆しています。
緑膿菌は、ヒト内皮細胞によって選択的に内在化されていますが、細胞内（IC）コンパートメントで効率的に殺されません。IC生存が細菌を含むエンドソーム - リソソーム（E-L）融合の失敗に関連しているかどうかを調査するために、内皮細胞はアルブミンコロイド型の金錯体および細菌懸濁液にさらされ、透過型電子顕微鏡（TEM）に提出されました。緑膿菌を含む液胞で金顆粒が検出され、E-L融合が発生したことを示しています。細菌も細胞の細胞質では自由に見られ、エンドソーム膜の破壊を示唆しています。ホスホリパーゼC（PLC）が液胞性溶解を説明できるかどうかを確認するために、PLC産生PAO1およびPAK株を、IC生存においてPLC欠損変異体（PLCN）と比較しました。ゲンタマイシン除外アッセイによって決定されるように、3つの株はすべて、内皮細胞によって等しく取り付けられました。3時間の感染後、PAKとPAO1のIC濃度は有意に増加しましたが、変異体の濃度は感染の1時間で実行可能なカウントの56.8 +/- 18.2％に減少しました。5時間後、緑膿菌のIC濃度は、PAK、PAO1、および変異体について、1時間で検出された実行可能なカウントの83.1 +/- 34.6％、109 +/- 22.6％、26.2 +/- 14.7％に相当しました。それぞれ。TEMによって、ほとんどのPao1を含む液胞は部分的に溶解した膜を呈したが、PLCN変異細菌に感染した細胞では、無傷の膜を持つ液胞で最も頻繁に観察された。これらの観察結果は、緑膿菌のIC生存が、E-L融合後の内皮細胞の微生物活性とエンドソームから逃げる細菌の能力との間の競合に起因することを示唆しています。
P. aeruginosa is selectively internalized by human endothelial cells but is not efficiently killed in the intracellular (IC) compartment. To investigate whether IC survival is associated with failure in bacteria-containing endosome-lysosome (E-L) fusion, endothelial cells were exposed to albumin-colloidal gold complex and to bacterial suspension and submitted to transmission electron microscopy (TEM). Gold granules were detected in P. aeruginosa-containing vacuoles, indicating that E-L fusion had occurred. Bacteria were also seen apparently free in the cell cytoplasm, suggesting disruption of endosome membranes. To ascertain whether phospholipase C (PLC) could account for vacuolar lysis, PLC producing PAO1 and PAK strains were compared with a PLC deficient mutant (PLCN) in their IC survival. All three strains were equally uptaken by the endothelial cells, as determined by the gentamicin exclusion assay. After 3 h of infection, the IC concentration of PAK and PAO1 increased significantly while the concentration of the mutant decreased to 56.8 +/- 18.2% of the viable counts at 1 h of infection. After 5 h, the IC concentration of P. aeruginosa corresponded to 83.1 +/- 34.6%, 109 +/- 22.6% and 26.2 +/- 14.7% of the viable counts detected at 1 h, for PAK, PAO1 and the mutant, respectively. By TEM, while most PAO1-containing vacuoles presented partially lysed membranes, in cells infected with the PLCN mutant bacteria were most often observed in vacuoles with intact membranes. These observations suggest that the IC survival of P. aeruginosa results from a competition between the microbicidal activity of endothelial cells following E-L fusion and the capacity of bacteria to escape from endosomes.
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