アレスチン/クラスリン相互作用クラスリン末端ドメインへのアレスチン結合遺伝子座の局在

以前、非視覚的なアレスチンは、Gタンパク質共役受容体の内在化におけるアダプター機能と一致するクラスリンとの高い親和性相互作用を示すことを実証しました（Goodman、O。B.、Jr.、Krupnick、J。G.、Santini、F.、Gurevich、V。V.、Pennnnnnnnn、R。B.、Gagnon、A。W.、Keen、J。H。、およびBenovic、J。L。（1996）Nature 383、447-450）。このレポートでは、球状クラスリン末端ドメイン内の高度に保存された残基の短いシーケンスがアレスチン結合の原因であることを示しています。クラスリンケージのタンパク質分解が限られていると、末端ドメインの放出が発生し、アレスチン結合の付随する廃止が発生します。視覚的なアレスチンではなく、視覚的なアレスチンではなく、視覚的なアレスチン、ベータアレスチン、アレスチン3は、特にグルタチオンS-トランスフェラーゼクレイラーズ末端ドメイン融合タンパク質に結合します。削除分析とアラニンスキャン変異誘発性は、結合部位をクラスリン重鎖の残基89-100に局在させ、残基1〜100が独立したアレスチン結合ドメインとして機能できることを示しています。部位指向変異誘発は、不変グルタミン（GLU-89）と2つの高度に保存されたライジン（LYS-96およびLYS-98）を、クラスリン結合（クラスリンバインディングに関与しているアレンジン3の疎水性および酸性の残基を補完するアレスチン結合に重要な残基として特定します。、J。G。、Goodman、O。B.、Jr.、Keen、J。H.、およびBenovic（1997）J。Biol。高親和性クラスリン結合を示しているにもかかわらず、アレスチンはコートアセンブリを誘導しません。端子ドメインは、コーティングされたピットの原形質膜に向けられており、アレスチンとAP-2の両方の結合は、このドメインがコーティングされたピットへの適応因子受容体の募集の原因となるアンカーであることを示唆しています。

Previously we demonstrated that nonvisual arrestins exhibit a high affinity interaction with clathrin, consistent with an adaptor function in the internalization of G protein-coupled receptors (Goodman, O. B., Jr., Krupnick, J. G., Santini, F., Gurevich, V. V., Penn, R. B., Gagnon, A. W., Keen, J. H., and Benovic, J. L. (1996) Nature 383, 447-450). In this report we show that a short sequence of highly conserved residues within the globular clathrin terminal domain is responsible for arrestin binding. Limited proteolysis of clathrin cages results in the release of terminal domains and concomitant abrogation of arrestin binding. The nonvisual arrestins, beta-arrestin and arrestin3, but not visual arrestin, bind specifically to a glutathione S-transferase-clathrin terminal domain fusion protein. Deletion analysis and alanine scanning mutagenesis localize the binding site to residues 89-100 of the clathrin heavy chain and indicate that residues 1-100 can function as an independent arrestin binding domain. Site-directed mutagenesis identifies an invariant glutamine (Glu-89) and two highly conserved lysines (Lys-96 and Lys-98) as residues critical for arrestin binding, complementing hydrophobic and acidic residues in arrestin3 which have been implicated in clathrin binding (Krupnick, J. G., Goodman, O. B., Jr., Keen, J. H., and Benovic, J. L. (1997) J. Biol. Chem. 272, 15011-15016). Despite exhibiting high affinity clathrin binding, arrestins do not induce coat assembly. The terminal domain is oriented toward the plasma membrane in coated pits, and its binding of both arrestins and AP-2 suggests that this domain is the anchor responsible for adaptor-receptor recruitment to the coated pit.