トランスジェニックマウスにおけるラット成長ホルモン放出ホルモン遺伝子プロモーターの胎盤特異的発現

GH放出ホルモン（GHRH）は、下垂体前葉のGHの合成と分泌を制御する上で重要な役割を果たす視床下部ペプチドです。他の多くの視床下部ホルモンとともに、GHRHは胎盤でも発現していますが、この組織における生理学的役割はまだ決定されていません。胎盤前ghrhは、視床下部に見られるものと同一です。ただし、胎盤および視床下部のGHRHメッセンジャーRNAは、翻訳されていないエクソン1に対応する領域で異なります。1。組織特異的プロモーターの使用とエクソン1の微分スプライシングを含む組み合わせメカニズムは、胎盤と甲状腺機能低下症に成熟したGHRHメッセンジャーRNAを生成します。GHRH遺伝子の胎盤特異的発現に関与する調節要素の局在化に向けた最初のステップとして、ラットGHRH遺伝子の潜在的な調節配列がクロラフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（CAT）レポーターに融合した構築物を含むトランスジェニックマウスを生成しました。遺伝子。胎盤転写スタート部位の上流の隣接配列の7.5キロ塩基を含むGHRH-CAT1を構築し、トランスジェニック動物のCAT発現を促進しませんでした。対照的に、コンストラクトghrh-cat2は、胎盤エクソン1から下流にある追加のシーケンスを持つことでghrh-cat1構成とは異なり、脳と胎盤で高レベルの猫の発現を示しました。我々の結果は、コンストラクトGHRH-CAT2に含まれるシーケンスには、胎盤におけるCAT遺伝子の発達的に調節された細胞型特異的発現を指示するために必要なシス作用調節要素が含まれていることを示しています。予想外に、脳内の導入遺伝子の発現は、異なる領域のグリア細胞で検出されましたが、視床下部では検出されませんでした。

GH-releasing hormone (GHRH) is a hypothalamic peptide that plays a critical role in controlling the synthesis and secretion of GH in the anterior pituitary. Along with many other hypothalamic hormones, GHRH is also expressed in the placenta, although its physiological role in this tissue has not yet been determined. The placental prepro-GHRH is identical to that found in the hypothalamus. However, the placental and hypothalamic GHRH messenger RNAs differ in the region corresponding to the untranslated exon 1. A combined mechanism involving the use of tissue-specific promoters and the differential splicing of exon 1 generates the mature GHRH messenger RNAs in placenta and hypothalamus. As a first step toward the localization of the regulatory elements involved in the placenta-specific expression of the GHRH gene, we have generated transgenic mice containing constructs in which potential regulatory sequences of the rat GHRH gene were fused to the chloramphenicol acetyltransferase (CAT) reporter gene. Construct GHRH-CAT1, which contains 7.5 kilobases of flanking sequences upstream to the placental transcription start site, did not promote CAT expression in the transgenic animals. In contrast, construct GHRH-CAT2, which differs from construct GHRH-CAT1 in having additional sequences located downstream to placental exon 1, exhibited high levels of CAT expression in brain and placenta. Our results show that the sequences included in construct GHRH-CAT2 contain the cis-acting regulatory elements necessary to direct developmentally regulated and cell type-specific expression of the CAT gene in the placenta. Unexpectedly, the expression of the transgene in the brain was detected in glial cells of different areas, but not in the hypothalamus.