単鎖FV抗体断片の発現におけるリンカーの重要性：ファージディスプレイ技術を使用したペプチド配列の最適化

分子の可変ドメインを結合するリンカーの配列を変更することにより、機能的シングルチェーンFV抗体フラグメント（SFV）の産生を強化する可能性を調査しました。機能的に改善された新しいリンカーを識別するために、リンカーに6つのアミノ酸のランダム配列を含むファージディスプレイライブラリを使用しました。抗原上の複数回のパンのパンは、抗原へのファージの結合を強化する6つの異なるリンカー配列を選択しました。5つのリンカーは、可溶性SFVの分泌も約5倍改善しました。分離された主要なリンカー配列の分析により、この改善は抗原に対する親和性の増加や細菌への毒性の変化によるものではないことが示されました。しかし、リンカーは尿素のSFVの変性に影響しました。したがって、新しいシーケンスが分子の再展開または分泌に役立つ可能性があります。

We have investigated the potential for enhancing the production of functional single-chain Fv antibody fragments (sFv), by altering the sequence of the linker that joins the variable domains of the molecule. To identify new functionally improved linkers we have used a phage display library containing a random sequence of six amino acids in the linker. Multiple rounds of panning on the antigen led to the selection of six different linker sequences that enhanced the binding of phage to the antigen. Five of the linkers also improved the secretion of soluble sFv by approximately five-fold. Analysis of the predominant linker sequence isolated showed that this improvement is not due to an increased affinity for the antigen, nor to alterations in the toxicity to bacteria. However the linker did affect the denaturation of the sFv in urea. It is therefore possible that the novel sequence helps in the refolding or secretion of the molecule.