授乳中のトランスジェニックマウスとウサギの乳腺における活性ヒトエリスロポエチンの発現

トランスジェニックマウスとウサギは、ウサギホエイ酸タンパク質遺伝子の5 'および3'調節配列の下でヒトエリスロポエチン（HEPO）cDNAを含むキメラ遺伝子を使用して生成されました。トランスジェニックマウスは、遺伝的構造が機能性であることを示す授乳中の雌の牛乳で0.01 mg/LのレベルでHEPOを発現しました。さまざまな組織からのRNAとの逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応は、この導入遺伝子が主に卵巣および乳腺で発現していることを示した。ウサギでは、導入遺伝子の生殖線の伝達を実証しました。HEPOは、最大0.0003 mg/Lのレベルで授乳中の雌の牛乳で得られました。発現レベルは低かったが、生物学的に活性なHEPOは、動物にとって明らかな有害な効果がなく、トランスジェニックウサギの牛乳で得られた。in vitroでは、ウサギ由来のHEPOの特定の活性は、天然のHEPOで報告されたものよりも高かったため、トランスジェニックウサギの乳腺によって分泌される分子の少なくとも一部のグリコシル化パターンの違いを示唆しています。

Transgenic mice and rabbits were generated using a chimeric gene comprising the human erythropoietin (hEPO) cDNA under the 5' and 3' regulatory sequences of the rabbit whey acidic protein gene. Transgenic mice expressed hEPO at levels of 0.01 mg/l in the milk of lactating females showing that the genetic construct was functional. Reverse transcriptase polymerase chain reaction with RNA from various tissues showed that this transgene was expressed mainly in the ovary and mammary gland. In rabbits, we demonstrated the germ line transmission of the transgene. The hEPO was obtained in the milk of lactating females at levels of up to 0.0003 mg/l. Although the expression levels were low, biologically active hEPO was obtained in the milk of transgenic rabbits without any apparent detrimental effect for the animals. In vitro, the specific activity of the rabbit-derived hEPO was higher than that reported for the natural hEPO, thus suggesting differences in the glycosylation pattern in at least part of the molecules secreted by the mammary gland of transgenic rabbits.