SIC1は、CDC4、CDC34、およびサイクリン/CDK活性を必要とする経路によってin vitroでユビキチン化されています

出芽酵母のサイクリング細胞におけるG1からS相への移動は、S期サイクリン/CDK阻害剤SIC1の破壊に依存しています。遺伝的データは、SIC1タンパク質分解がユビキチン経路によって媒介され、CDC34、CDC4、CDC53、SKP1、およびCLN/CDC28の作用が必要であることを示唆しています。対応する遺伝子産物の機能を定義するための最初のステップとして、DEAE分散酵母抽出物におけるSIC1多統一を再構成しました。マルチユビキチン化は、サイクリン/CDC28プロテインキナーゼとCDC34ユビキチン結合酵素に依存します。ユビキチン鎖の形成は、外因性CDC4の添加により復元されたCDC4TS変異体抽出物およびアセンブリで廃止され、SIC1マルチユビキチン化におけるこのタンパク質の直接的な役割を示唆しています。SIC1の削除分析は、N末端160残基がCDC34依存性ユビキチン化の基質として機能するために必要かつ十分であることを示しています。SIC1の相補的なC末端セグメントは、S期サイクリンClb5に結合し、SIC1のモジュラー構造を示しています。

Traversal from G1 to S-phase in cycling cells of budding yeast is dependent on the destruction of the S-phase cyclin/CDK inhibitor SIC1. Genetic data suggest that SIC1 proteolysis is mediated by the ubiquitin pathway and requires the action of CDC34, CDC4, CDC53, SKP1, and CLN/CDC28. As a first step in defining the functions of the corresponding gene products, we have reconstituted SIC1 multiubiquitination in DEAE-fractionated yeast extract. Multiubiquitination depends on cyclin/CDC28 protein kinase and the CDC34 ubiquitin-conjugating enzyme. Ubiquitin chain formation is abrogated in cdc4ts mutant extracts and assembly restored by the addition of exogenous CDC4, suggesting a direct role for this protein in SIC1 multiubiquitination. Deletion analysis of SIC1 indicates that the N-terminal 160 residues are both necessary and sufficient to serve as substrate for CDC34-dependent ubiquitination. The complementary C-terminal segment of SIC1 binds to the S-phase cyclin CLB5, indicating a modular structure for SIC1.