アグロバクテリウム媒介形質転換中のバイナリベクトル全体を含むDNAの頻繁なコリニアの長い移動

Agrobacteriumを使用してNicotiana Plumbaginifoliaプロトプラストとシロイヌナズナthalianaの根と苗木を変換すると、境界反復シーケンスによって定義されたT領域だけでなく、両方のPCRによって決定されたバイナリベクトル全体が統合された多数の植物が見つかりました。および南部の分析手法。N. Plumbaginifoliaプロトプラスト共栽培実験により、5つの形質転換体のうち3つが左の境界を越えて共線配列が得られました。シロイヌナズナの根形質転換実験では、形質転換体の33％（6/18）にはT-DNAがあり、左の境界繰り返しを超えていました。シロイヌナズナの苗の真空浸潤は、左の境界の外側に配列が繰り返される（62％、39/63）、より多くの割合の形質転換体さえも生成しました。T2子孫のT-regionエンコードされたヒグロマイシン抵抗性と共存した長い移動DNAは、長いトランスファーDNAが染色体外またはアグロバクテリウムの起源である可能性を排除しました。T-DNAタグ付けされた変異体を分析する際には、A。thalianaの真空浸潤後の長い移動の高頻度を考慮する必要があります。

When Agrobacterium was used to transform Nicotiana plumbaginifolia protoplasts and Arabidopsis thaliana roots and seedlings, a large number of plants were found in which not only the T-region defined by the border repeat sequences but the entire binary vector was integrated, as determined by both PCR and Southern analysis techniques. N. plumbaginifolia protoplast co-cultivation experiments yielded 3 out of 5 transformants with collinear sequence past the left border. In Arabidopsis root transformation experiments, 33% (6/18) of the transformants had T-DNA which exceeded the left border repeat. Vacuum infiltration of Arabidopsis seedlings produced even a greater percentage of transformants with sequences outside the left border repeat (62%, 39/63). The long transfer DNA cosegregated with the T-region encoded hygromycin resistance in the T2 progeny eliminating the possibility that long transfer DNA was of extrachromosomal or Agrobacterium origin. The high frequency of long transfer after vacuum infiltration of A. thaliana needs to be considered when analyzing T-DNA tagged mutants.